Facen.una.py



Vol. 6 – 2014
ISSN 2077-8430
Pleurotus albidus Laboratorio de Análisis de Recursos Vegetales
Departamento de Biología
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Universidad Nacional de Asunción
UNIVERSIDAD NACIONAL DE ASUNCION
Prof. Dr. Froilán Enrique Peralta Torres FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES
Prof. Lic. Constantino Nicolás Guefos K., MAE CUERPO EDITORIAL
-Comité Científico
Bonifacia Benitez de Bertoni -Griselda Marín O., Facultad de Cien- cias Exactas y Naturales -Asistente de edición
-María Vera, Facultad de Ciencias Exac- Claudia Pereira Sühsner -Christian Vogt, Facultad de Ciencias Fidelina González Galeano Exactas y Naturales -Lidia Pérez de Molas, Facultad de -Comité Editorial
Ciencias Agrarias -Juana Inés De Egea, Wildlife Conserva- -Pastor Arenas, Centro de Estudios tion Society (WCS) Farmacológicos y Botánicos(CEFYBO- -Danilo Fernández R. Facultad de Cien-CONICET), Universidad de Buenos cias Exactas y Naturales Aires, Argentina -Hector Nakayama, CEMIT-UNA -María Fátima Mereles H., Parque Tec- nológico Itaipú, FPTI-PY -Revisión de escrito en Inglés
-Cecilia Trillo, Universidad Nacional de Córdoba, Argentina -Nidia Beatriz Benítez Candia, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Revista Steviana: Indexada al Catálogo de Latindex, Nº de Folio 21767
DIRECCIÓN OFICIAL
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales-UNA Teléfono-fax: (595-21) 585 600 Dirección Postal: 1039 Campus Universitario, San Lorenzo-Paraguay Páginas
Contenido
5 -12 -Propiedad antichagásica in vitro e in vivo de maculina aislada de Helietta apiculata Benth. (Rutaceae) María Elena Ferreira, Hector Nakayama, Susana Torres, Gloria Yaluff, Luis Sana-bria, Ninfa Vera de Bilbao, Alicia Schinini, Antonieta Rojas de Arias, Isabelle Guy, Helene Guinaudeau, Alain Fournet 13 - 19 -Incidencia y distribución de hongos filamentosos durante el proceso de beneficio húmedo del café Andrea Alejandra Arrúa Alvarenga, Martha Yolanda Quezada Viay, Danilo Fernández Ríos, Ernesto Moreno Martínez, Alberto Flores Olivas 20 - 35 -Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis Juliana Moura Mendes Arrua, Fillipe de Oliveira Pereira, Felipe Queiroga Sarmen-to Guerra, Everardo Albuquerque Menezes, Francisco Afrânio Cunha, Edeltrudes Oliveira Lima 36 - 49 -Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario-UNA Gilberto Antonio Benítez Rodas, Héctor David Nakayama, Juliana Moura Arrúa, Griselda Franco Cardozo, Rocío Rosmary Acosta Brítez, Liza María Ramírez Garay 50 - 69 -Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syria- cum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor Miguel Martínez, Claudia Mancuello, Claudia Pereira, Fidelina González, Bonifa-cia Benítez, Francisco Ferreira, César Sena 70 - 79 - El género Pleurotus (Pleurotaceae-Basidiomycota) en Paraguay Alma Flecha Rivas, Barbara De Madrignac, Michelle Campi 80 – 101 - Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai Bonifacia Benítez, Maria Vera, Siemens Bertoni Propiedad antichagásica in vitro e in vivo de maculina aislada de
Helietta apiculata Benth. (Rutaceae)
María Elena Ferreira 1,2, Hector Nakayama 1, Susana Torres1, Gloria Yaluff 1,2, Luis Sanabria1, Ninfa
Vera de Bilbao1, Alicia Schinini1, Antonieta Rojas de Arias 3, Isabelle Guy 4, Helene Guinaudeau 4, Alain
Fournet 5
1 Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud – UNA
2 Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - UNA
3 Centro para el Desarrollo de la Investigación Científica (CEDIC/FMB/Diaz Gill Medicina Laboratorial),
Asunción, Paraguay CEDIC.
4 Substances d'Origine Naturelle et Analogues Structuraux, Faculté de Pharmacie, Université d'Angers,
Angers, France.
5 IRD US 084, Laboratoire de Pharmacognosie, Faculté de Pharmacie, rue J.B. Clément, 92296
Châtenay.-Malabry cedex, France.
E mail del autor:
Actividad antichagásica in vitro e in vivo de maculina aislada de Helietta apiculata Benth (Ruta-
ceae
).
La enfermedad de Chagas es uno de los problemas de salud pública más graves en el continente ameri-
cano. Más allá de las campañas y programas que los países han desarrollado para informar, prevenir y
sensibilizar sobre la enfermedad, sus causas y formas de transmisión, el verdadero desafío está en en-
contrar una cura. En este trabajo se estudió la actividad anti-T. cruzi de maculina aislada a partir de corte-
za de tallo de Helietta apiculatta Benth —una Rutaceae muy abundante en Paraguay— y estudiada me-
diante ensayos in vitro e in vivo sobre la cepa Cl (Brener). En los ensayos in vitro la maculina presentó
niveles muy bajos de actividad anti-T. cruzi; sin embargo, el ensayo in vivo presentó nivel alto de activi-
dad. La maculina modificó el curso de la infección en ratones en comparación con el grupo control, pre-
sentando parasitemias en 62,5% en la administración por vía sub-cutánea y en 97,5% por vía oral, en los
días 18 y 68 post-infección respectivamente, a diferencia del grupo control que presentó 100% de parasi-
temia. Los ratones tratados con benznidazol y maculina comparados con el grupo control en todo el curso
de la infección presentaron diferencias significativas en la disminución de la parasitemia, el benznidazol
(p<0,005) y la maculina (p<0,001), ambos administrados por vía oral y la maculina por vía sub-cutánea
(p<0,005) respectivamente. En la evaluación serológica (ELISA), los ratones tratados con maculina y
benznidazol —ambos por vía oral— presentaron 75% de serología negativa en la primera determinación,
ambos estadísticamente significativos, el benznidazol (P<0,001) y la maculina (P<0,05), y los valores de
densidad óptica más bajos en el benznidazol. En la segunda determinación se observa 37,5% de negati-
vización serológica en todos los grupos tratados, también estadísticamente significativos, donde la macu-
lina presentó valores de (p<0,001) y el benznidazol (P<0,05), ambos vía oral y la maculina (P<0,05) vía
subcutánea. Los valores de la densidad óptica más bajos se vieron en maculina administrada por vía oral.
Palabras claves: Trypanosoma cruzi, Helietta apiculata, maculina, ensayos biológicos
In vitro and in vivo antichagasic activity of maculine isolated from Helietta apiculata Benth
(Rutaceae).
Chagas disease is one of the most serious public health problems in the Americas. Beyond
the campaigns and programs that countries have developed to inform, prevent and raise awareness, the
real challenge is to find treatment. This work studied the in vitro and in vivo anti-T. cruzi activity of maculine
isolated from the stem bark of Helieta apiculatta Benth on the Cl (Brener) strain of T. cruzi. In vitro bioas-
says with maculine showed very low level of activity against T. cruzi; however, the in vivo assays present-
ed a high level of activity. Maculine modified the course of infection compared to the control group; pre-
senting parasitaemia in 62.5% in subcutaneous administration and 97.5% in oral administration at 18 and
Steviana, Vol. 6, 2104, pp. 5- 12 Recibido 3 julio 2014; aceptado 4 noviembre 2014 Steviana, Vol. 6. 2014. Ferreira et al. Propiedad antichagasica in vitro e in vivo de maculina aislada de Helietta apiculata Benth. (Rutaceae) 68 days post-infection respectively, while the control group presented 100% of parasitaemia. Mice treated
with maculine, compared to the control group, showed significant differences in the decrease of
parasitaemia; benznidazole (P <0.005) and maculine (P <0.01), both administered orally, and maculine (P
<0.05) administered subcutaneously. In the serological evaluation (ELISA), mice treated with maculine and
benznidazole —both orally administered— presented 75% of negative serology in the first determination,
both statistically significant, benznidazole (P<0,001) and maculine (P<0,05); and the lowest optical density
values were observed in benznidazole. In the second determination, 37.5% of mice showed negative se-
rology in all treated groups, also statistically significant, where maculine presented (p <0.001) values and
benznidazole presented (P<0,05) values when administered orally; and maculine showed (P <0.05) values
whenadministered subcutaneously. The lowest optical density values were observed in orally administered
maculine.
Keywords
: Trypanosoma cruzi, Helietta apiculata, biological assays
nología y la innovación para el desarrollo, y puede ser capitalizado, a través del conoci- miento, hacia la generación de genuinos re- Las plantas medicinales han sido conside- cursos financieros (Ibarrola et al. 2011) radas a través de los años como el origen o Las infecciones parasitarias son un pro- punto de partida del desarrollo de los medi- blema de salud a nivel mundial: esto es parti- camentos, ya que han contribuido grandemen- cularmente cierto para los países subdesarro- te al descubrimiento de nuevas sustancias con llados, donde estas enfermedades también actividad biológica y a la producción de fi- causan una pérdida económica importante tofármacos. Es la fuente de medicamentos (Rollo 1991). La enfermedad de Chagas es más económica y de mayor disponibilidad uno de los problemas de salud pública más para la mayoría de los países (Tillan, 2002). graves que existe en el continente. Más allá de En Paraguay, los practicantes de la medi- las campañas y programas que los países han cina tradicional son abundantes y formulan desarrollado para informar, prevenir y sensibi- tratamientos basados mayoritariamente en lizar a las personas sobre la enfermedad, sus plantas, si bien los aspectos como la calidad, causas y formas de transmisión, el verdadero la seguridad y la eficacia requieren de una desafío está en encontrar una cura. atención más científica y dedicada (Ibarrola, El tratamiento actualmente disponible en el et al. 2011). Habitamos un país con gran mercado para el tratamiento de la enfermedad número de especies vegetales utilizadas para de Chagas está limitado a solo dos medica- fines medicinales, y localmente existen de- mentos: nifurtimox (Lampit®, Bayer) y benz- mandas de la sociedad para la cobertura en nidazol (Lafepe®, Brasil). Estos compuestos productos innovadores en las áreas de la sa- presentan severos efectos colaterales y son lud, industria y gestión del ambiente. Dispo- más exitosos en la infección aguda y en la nemos de especies nativas domesticadas, que crónica temprana (De Andrade et al. 1996). racionalmente utilizadas asegurarán el desa- Generalmente, la enfermedad se diagnostica rrollo sustentable del rubro. En el mismo sen- en la fase crónica cuando la terapia ya es in- tido, la OMS reconoce y recomienda la vali- eficaz (Cerecetto and Gonzalez 2002; Caldas dación científica de la medicina popular en et al. 2008). Existe una urgente necesidad de vistas a implementar programas sanitarios nuevos medicamentos para la quimioterapia basados en plantas, que por ser de uso corrien- de la enfermedad de Chagas (Rassi et al. te, ven su aceptación facilitada. Las plantas 2010). Aunque se necesitan nuevos y eficien- medicinales han sido identificadas como una tes tratamientos para la enfermedad, solo una oportunidad en el campo de la ciencia, la tec- clase de drogas está en desarrollo clínico, los Steviana, Vol. 6. 2014. Ferreira et al. Propiedad antichagasica in vitro e in vivo de maculina aislada de Helietta apiculata Benth. (Rutaceae) triazoles, que han emergido como un nuevo A. Fournet y M. E. Ferreira en el mes de mar- tratamiento potencial (Ribeiro et al. 2009). zo de 1995 en la Compañía Paso hú de Piribe- En estudios recientes se han demostrado buy, Departamento de Cordillera, Paraguay, e que el extracto crudo de la corteza del tallo y identificado por N. Soria (Departamento de las hojas de una planta perteneciente a la flora Botánica de la Facultad Ciencias Químicas paraguaya el Zanthoxylum chiloperone y los Universidad Nacional de Asunción, Para- alcaloides de tipo canthinonas, canthin-6-ona y 5-methoxycanthin-6-ona, estraídos de esa misma planta presentaron actividad contra el Identificación Taxonómica y descripción Trypanosoma cruzi (Ferreira et al. 2007), por de los especímenes vegetales lo que se ha sugerido que el estudio de otras Es una especie botánica de la familia Ruta- plantas puede ser un camino de interés para el ceae. Es endémica de Argentina y Paraguay. tratamiento barato y seguro frente a cepas Es heliófita, de matorrales y otros ambientes resistentes a los pocos medicamentos existen- caracterizados por formaciones subclimáxicas tes actualmente contra el T. cruzi. edáficas, encontrándose asociada con pindo En éste trabajo se estudió la actividad anti- . También habita Trypanosoma cruzi en ensayos in vitro e in sitios húmedos secundarios y chacras. Es vivo sobre la cepa Cl (Brenner) del alcaloide endémica en la zona de Piribebuy, lugar don- maculina (Figura 1) aislado a partir de corteza de se realizó la cosecha de los especímenes de tallo de Helieta apiculatta Benth una Ruta- ceae muy abundante en nuestro país. Nombres vernáculos: "yvyrá oví" (yvyrá= El objetivo del trabajo fue evaluar la acti- árbol, ov= hoja, i= pequeña) es decir, árbol de vidad anti-Trypanosoma cruzi in vitro del hojas pequeñas o puntiagudas"; "yvyrá oví alcaloide maculina extraído de la corteza de guasú" (guasú= grande o mayor) refiriendosé tallo de Helietta apiculata Benth., en ensayos al tamaño del árbol. Es un árbol siempre ver- in vitro e in vivo frente a parásitos CL (Bren- de, de tamaño mediano con una altura de 10 – ner) de Trypanosoma cruzi por vías oral y 25 m. Es muy difundido en la Región orien- tal, tanto en la cuenca del río Paraná como en MATERIALES Y MÉTODOS
la del Paraguay. Su madera amarilla es usada para la confección de flechas y arcos por los Para la evaluación antiparasitaria se utili- indios mbyá. Localmente se utiliza la madera zaron ensayos "in vitro" e "in vivo" en mode- en construcción y para la fabricación de carre- los de investigación en ratones, como paso tas, yugos y otros artículos de utilidad rural. importante para ensayos más avanzados, co- Es además fuente de energía ya que con él se mo son los modos de acción de la droga y prepara leña y carbón, su regeneración es estudios farmacodinámicos. rápida (Basualdo et al. 1997). En los yerbales la prefieren para el sapecado y tostado de la Material de estudio yerba mate porque despide muy poco humo al arder (López 1987) Su corteza tiene virtudes Colecta de los especímenes vegetales en afrodisíacas. Utilizada también, en la elabora- ción de utensilios como mango de herramien- La especie vegetal Helietta apiculata tas. Además, es utilizada por sus propiedades Benth. utilizada para la realización de los anti-inflamatorias como medicina popular en ensayos in vitro e in vivo fue recolectada por forma de infusiones. (Ferreira et al. 2011). El Steviana, Vol. 6. 2014. Ferreira et al. Propiedad antichagasica in vitro e in vivo de maculina aislada de Helietta apiculata Benth. (Rutaceae) secado, envenenado y montaje de ejemplares UNA), infectados experimentalmente con fue realizado según metodología convencional parásitos sanguíneos de Trypanosoma cruzi de para tratamiento de especímenes. la cepa CL (Brenner) mantenidos en ratones La identificación correcta del ejemplar en estudio con el concurso de un profesional isoenzimático. La sangre de los ratones Botánico (Dra. Nélida Soria) es un paso indis- albinos infectados se obtuvo por punción pensable antes del estudio fitoquímico, farma- cardíaca usando citrato de sodio al 3.8 % cológico y/o toxicológico (Miguel Martínez et al. 2011). Un espécimen de la planta fue de- sangre/anticoagulante de 7:3. La maculina positado en el Herbario de la Facultad de (Figura 1) fue disuelta en DMSO (acido Ciencias Químicas UNA con el código (AF dimetilsulfóxido) a una concentración final de 912), luego de haber sido identificado por la Dra. Nélida Soria. Alícuotas de 10 ul del producto en diferentes concentraciones (4, 20, 100 y 250 Preparación de los materiales vegetales ug/ml) fueron mezcladas en microplacas con para extracción y uso 100 ul de sangre conteniendo concentraciones de parásitos de 1x 106 parásitos por ml. La corteza de Helietta apiculata Benth. Sangre infectada con DMSO y sangre utilizada en este estudio, fue secada a infectada conteniendo violeta de genciana temperatura ambiente durante una semana, fueron usadas como controles. Las placas bajo sombra, para evitar la acción de la luz, la fueron agitadas por 10 minutos a temperatura temperatura y la acción de microorganismos ambiente luego mantenidas a 4 °C por 24 que pudieran descomponer los compuestos horas. Cada solución con 5 ul de muestra en originales (Miguel Martínez et al, 2011). lámina cubierta con laminilla 22x22 fue Molienda y tamizado del material vegetal La molienda se ha realizado con una máquina forrajera convencional y el tamizado por medio de un tamiz de acero inoxidable de parásitos (Fournet 0.5 mm de diámetro. Todos los aislamientos Figura 1. Estructura de la finales e identificaciones de los productos de furoquinoleina maculina (1) ésta planta fueron realizados en el laboratorio Estudios in extraida de Helietta apicula- de Farmacognosia de la Facultad de Angers- Francia, por las Dras. Isabelle Guy y Helene
Animales
Guinaudeau coordinados por el Dr. Alain albinos machos y hembras criados y mantenidos en el bioterio del Instituto de Ensayos in vivo e in vitro (Lisis de parásitos) Investigaciones en Ciencias de la Salud de Helietta apiculata. (IICS), Asunción – Paraguay. Estudios in vitro (Lisis de parásitos) Tratamiento
tratamientos se iniciaron al comprobarse que Fueron utilizados ratones albinos obtenidos la infección estuviera bien establecida, a en el bioterio del IICS (Instituto de través de parasitemias directas, lo que Investigaciones en Ciencias de la Salud – ocurrió a tres días post-infección, y duró 15 Steviana, Vol. 6. 2014. Ferreira et al. Propiedad antichagasica in vitro e in vivo de maculina aislada de Helietta apiculata Benth. (Rutaceae) días con una administración diaria. Los Las diferencias entre los grupos se ratones fueron divididos al azar en cuatro determinaron usando el test t de Student. La
grupos de ocho ratones cada uno. El significancia se estableció para P < 0.05. benznidazol por vía oral a una concentración (Ferreira et al. 2011) de 50 ug/ml fue utilizado como droga de referencia. La maculina fue administrada por RESULTADOS
vía oral y sub-cutánea a una concentración de 5 mg/kg de peso, y un grupo infectado fue el Ensayos in vitro e in vivo control no tratado a quienes se les administró En los ensayos in vitro realizados con el por vía oral solución fisiológica. producto maculina (Figura 1), extraído de la En todos los grupos de ratones las corteza de tallo de Helietta apiculata Benth., parasitemias fueron determinadas en sangre podemos observar que presentó 63 % de lisis venosa de la cola semanalmente durante 68 de parásitos, niveles muy bajos de actividad días. El suero de los ratones infectados fue anti-Trypanosoma cruzi, sin embargo, en los evaluado por un ensayo inmunoenzimático ensayos in vivo presentó resultados muy aus- (ELISA), al terminar el tratamiento y al piciosos. La maculina (Vaquette et al. 1976), finalizar el protocolo, con el fin de determinar extraída de Helietta apicullata Benth. fué bien el nivel de anticuerpos anti Trypanosoma tolerada por los ratones y no pudimos obser- cruzi. Una vez obtenido todos los resultados var ningún efecto colateral en los experimen- se analizaron estadísticamente. tos. A continuación se presentan las tablas de resultados de los ensayos in vivo realizados.
Tabla 1. Efecto del tratamiento con maculina, en ratones experimentalmente infectados con Trypanosoma cruzi (fase aguda). Evaluación parasitológica Dias post-infección PARASITEMIA MEDIA ± SD p < 0.005
p < 0.005
p<0.05
p < 0.005
*Periodo de tratamiento (dos semanas) Benznidazol: droga de referencia P < 0.005 con relación al control N° de ratones por grupo: 8 Steviana, Vol. 6. 2014. Ferreira et al. Propiedad antichagasica in vitro e in vivo de maculina aislada de Helietta apiculata Benth. (Rutaceae) Tabla 2. Efecto del tratamiento con maculina en ratones experimentalmente infectados con Trypanosoma cruzi (Fase aguda). Evaluación serológica 1° Serología (a) 2° Serología (b) Densidad óptica Densidad óptica (Cut-off, 0,264) (Cut-off, 0,264) 0.3985  0.0922 0.1692  0.1179 p < 0.001
p < 0.05
0.2098  0.1368 p < 0.05
p < 0.001
0.2795  0.1944 p < 0.05
(a) 40 días post-infección; 15 días post-finalización del tratamiento. P<0.001 c/ relación al control (b) 68 días post-infección; 45 días post-finalización del tratamiento. P>0.05 c/ relación al control Benznidazol: droga de referencia ficativas de P < 0,01 y P < 0.005 respectiva- DISCUSION Y CONCLUSIONES
En la Tabla 3 están presentados los resul- En los ensayos in vitro realizados con el tados de la evaluación serológica (ELISA), y producto maculina, extraído de la corteza de vemos que la maculina administrada por vía tallo de Helietta apiculata Benth., podemos oral presentó el mismo comportamiento que el observar que presentó 63 % de lisis de parási- benznidazol, comparadas con el grupo con- tos, niveles muy bajos de actividad ant- Try- trol, con 75% de negativización serológica panosoma cruzi, sin embargo, en los ensayos para ambos grupos en la primera determina- in vivo presentó resultados muy auspiciosos. ción, siendo estadísticamente significativa La administración de maculina modificó para P < 0.001 en el benznidazol y P < 0.05 el curso de la infección comparado con el para la maculina, siendo los valores de la den- grupo control; los niveles de parasitemia se sidad óptica más bajos en el benznidazol. En pueden ver en la Tabla 2. Este grupo presentó la segunda determinación se observó un el día 18 post-infección parasitemias negati- 37.5% de negativización serológica en los tres vas en 5 de 8 ratones (62.5%) y el día 68 grupos tratados, con una inversión de los valo-(día del sacrificio) 7de 8 ratones (87.5%) con res de densidad optica para la maculina ad- parasitemias negativas a diferencia del control ministrada por vía oral (p < 0.001) al compa- rar con la densidad optica del benznidazol y Los ratones tratados con el benznidazol, la maculina administrada por vía subcutánea demostraron que en todo el curso de la infec- (P < 0.05) (Tabla 2). Aunque la respuesta ción presentaron diferencias significativas (P< inmune en este modelo fue más evidente en 0,005) en la disminución de la parasitemia animales tratados con benznidazol y la macu- comparadas con el grupo control, lo mismo lina por vía oral que en los ratones no trata- que los tratados con maculina por vía oral y dos, se debe destacar que el criterio de cura es sub-cutánea que alcanzaron diferencias signi- la negativización de las pruebas serológicas o Steviana, Vol. 6. 2014. Ferreira et al. Propiedad antichagasica in vitro e in vivo de maculina aislada de Helietta apiculata Benth. (Rutaceae) al menos, una regresión progresiva y persis- apy during acute phase of Chagas disease tente del título de anticuerpos (Ferreira et al. reduces parasite load but does not prevent chronic cardiac lesions". Parasitology Re- Este estudio mostró que el tratamiento con search 103, 413–421. maculina por vía oral a ratones infectados Cerecetto, H. & Gonzalez, M. 2002. "Chemo- experimentalmente con Trypanosoma cruzi therapy of Chagas' disease: status and new produjo la cura parasitológica y serológica developments". Current Topics in Medici- similares a los tratados con la droga de refe- nal Chemistry 2, 1187–1213. rencia, el benznidazol, pues se observó nega- De Andrade, A.L., Zicker, F., de Oliveira, tivización serológica y parasitológica en por- R.M., Almeida Silva, S., Luquetti, A., centajes similares en ambos grupos. Travassos, L.R., Almeida, I.C., de An- En conclusión, este estudio revela que el drade, S.S., de Andrade, J.G., Martelli, producto maculina aislado de la corteza de C.M. 1996. "Randomised trial of efficacy tallo de Helietta apiculata presenta un efecto of benznidazole in treatment of early tripanocida en ensayos experimentales in vivo, Trypanosoma cruzi infection". Lancet 348, constituyéndose en excelente candidato para completar estudios biológicos, toxicológicos y Dreyer, D.L. 1969. "Coumarins and alkaloids químicos y se convierte en una nueva pers- of the Genus Ptelea". Phytochemistry 8, pectiva para el tratamiento de la enfermedad Ferreira, M.E., Nakayama, H., Rojas de Arias, Finalmente debemos recalcar que el uso A., Schinini, A., Vera de Bilbao, N., Serna, tradicional de plantas medicinales para una E., Torres de Ortiz, S., Sanabria, L., La- gran parte de la población mundial, es la única goutte, D., Soriano-Agatón, F., Poupon, E., vía de tratamiento contra éstas y muchas otras Hocquemiller, R., Fournet, A. 2007. "Ef- enfermedades, y que la investigación de los fects of alkaloids from Zanthoxylum productos naturales puede ser empleada para chiloperone Trypanosoma la solución de problemas de salud y bienestar infected mice". Journal of Ethnopharma- cology 109, 258–263. Ferreira, M. E., Cebrián-Torrejón, G., Segovia REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Corrales, A., Vera de Bilbao, N., Rolón M., Vega Gómez, C., Leblanc, K., Yaluff, Arias, A. R., Ferro, E. A. 1988. "Quantifica- G., Schinini, A., Tórres, S., Rojas de Arias, ción of Trypanosoma cruzi parasitemia A., Poupon, E., Fournet, A. 2010. "Zan- Bydirect Micromethd". Trans R Soc Trop thoxylum chiloperone leaves extract: First Med Hyg. 82: 248. Sustainable Chagas Disease treatment". Basualdo, I., Soria Rey, N., Keel, S., Rivarola, Journal Ethnofharmacol. Doi. 10.1016 N. 1997. "Recursos Fitigenéticos. Parque j.jep 2010.2011.032 Nacional Cerro Corá-Amambay. Plantas Ferreira, M. E., Rojas de Arias, A., Yaluff, G., Útiles". DPNUS. Facultad de Ciencias Vera de Bilbao, N., Nakayama, H., Torres, Químicas S. Lorenzo - Paraguay, The Na- S., Schinini, A., Guyc, I., Heinzen, H., ture Conservancy. p. 66-67. Fournet, A. 2010. "Antileishmanial activi- Caldas, I. S.,Talvani, A., Caldas, S., Carneiro, ty of furoquinolines and coumarins from C.M., de Lana, M., da Matta Guedes, P. Helietta apiculata". Phytomedicine 17 M., Bahia, M.T. 2008. "Benznidazole ther- Steviana, Vol. 6. 2014. Ferreira et al. Propiedad antichagasica in vitro e in vivo de maculina aislada de Helietta apiculata Benth. (Rutaceae) try and Chemical Taxanomy of the Fournet, A., Ferreira, M. E., Rojas de Arias, Rutales". Academic Press, London. A., Schinini, A., Nakayama, H., Tórres, S., Pozzi, H., Sanchez, E., Comin, J.H. 1967. Sanabria, R., Guinaudeau, H. & Bruneton, "Studies on argentine plants—XXII: J. 1996. "The effect of bisbenzyisoquinoli- Heliettin, a new furocoumarine from ne alkaloids on Trypanosoma cruzi" Mem Helietta longifoliata Britt". Tetrahedron Inst Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Vol 91, 23, 1129–1137. Rassi Jr., A., Rassi, A., Marin-Neto, J.A. Galan, R.H., Massanet, G.M., Pando, E., Ro- 2010. "Chagas disease". Lancet 375, driguez, L.F., Salva, J. 1988. Synthesis of (7)3-1',1'-dimethylallyl)decursinol and 3- Robertson, A.V. 1963. "The protonmagnetic (1'- 1'-dimethylallyl) xanthyletin. Hetero- re´sonance of furoquinoline alkaloids and cycles 27, 775–777. related compounds". Austr. J. Chem. 6, Ibarrola, D. A. y Dejen de Arrúa, R. L. (Edi- tores) 2011. "Catálogo Ilustrado de 80 Ribeiro, I., Sevcsik, A.M., Alves, F., Diap, G., plantas Medicinales del Paraguay". Facul- Don, R., Harhay, M.O., Chang, S., Pecoul, tad de Ciencias Químicas – UNA & Agen- B. 2009. "New, improved treatments for cia de Cooperación Internacional del Chagas disease: from the R & D pipeline Japón (JICA). Pp. 178. to the patients". PLoS Neglected Tropical Ito, C., Itoigawa, M., Otsuka, T., Tokuda, H., Diseases 3, e 4841, 1–6. Nishino, H., Furukawa, H. 2000. "Constit- Rollo, I. M. 1991. "Medicamentos empleados uents of Boronia pinnata" J. Nat. Prod. 63, en el Tratamiento de las infecciones por protozoos". En: Goodman L S & Gilman López, J. A., Little Jr., E. L., Ritz, G. F., A. "Bases Farmacológicas de la Terapéu- Rombold, J. S., Hahn, W. J., Sterrett, W. tica. Quimioterapia de las parasitosis" Cap. R., Mc Donald, M. J. 1987. "Arboles co- munes del Paraguay – Ñande yvyra mata Sankar, S.S., Gilbert, R.D., Fornes, R.E. 1982. kuera". Cuerpo de Paz. Martínez, M., Pereira, C., González, F., hydroxycoumarins Benítez, B., Verdan, M., Obdulio, M., pounds". Organ. Magn. Reson. 19, 222– Miyazaki, C. 2011. "Estudio y utilización de dos especies vegetales para la obtención Tillan, J. 2002 Editorial. Rev. Cub. de Plantas de un medicamento piloto rico en Medicinales. Vol 7 02. En: Fragas, I.; minerales y omega-3. Steviana, Vol. 3. pp. Melchor, G.; Ruiz, L.; Fernández, O.; Lo- 54-68". En: Hostettmann K. et al, 2008. renzo, O. y Rodríguez, J." Estudio de efi- "Manual de Estrategias para el aislamiento cacia farmacológica de una crema de Rhi- de productos naturales bioactivos". Bogotá zophora mangle L." Rev. Salud Anim. Vol.
–Colombia: Convenio Andrés Bello. 120p. 25 No. 3: 173-179. Mester, I. 1983. "Structural diversity and dis- Vaquette, J., Hifnawy, M.S., Pousset, J. L., tribution of alkaloids in the Rutales". In: Fournet, A., Cave´, A. 1976. "Alcaloides Waterman, P.G. (Ed.), Grundon "Chemis- d'Araliopsis soyauxii". Phytochemistry 15, 743–745. Incidencia y distribución de hongos filamentosos durante el proceso de
beneficio húmedo del café

Andrea Alejandra Arrúa Alvarenga1,3, Martha Yolanda Quezada Viay2, Danilo Fernández Ríos3, Ernesto
Moreno Martínez2, Alberto Flores Olivas4
1Laboratorio de Biotecnología, Centro Multidisciplinario de Investigaciones Tecnológicas (CEMIT),
Dirección General de Investigación Científica y Tecnológica (DGICT), Universidad Nacional de Asun-
ción (UNA).
2Escuela de Postgrado, Unidad de Investigación en Granos y Semillas (UNIGRAS), Universidad Nacio-
nal Autónoma de México (UNAM).
3Departamento de Biotecnología, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (FACEN), Universidad Na-
cional de Asunción (UNA).
4Laboratorio de Parasitología Molecular, Departamento de Parasitología Agrícola, Universidad Autónoma
Agraria Antonio Narro (UAAAN).
E-mail del autor:
Incidencia y distribución de hongos filamentosos durante el proceso de beneficio húmedo del
café.
El café es una de las bebidas más tradicionalmente consumidas a nivel mundial. Durante su cultivo
y procesamiento puede ser contaminado por diversos microorganismos, entre ellos los hongos filamento-
sos. En este trabajo se identificaron las especies presentes a lo largo del beneficio húmedo. Además se
analizó la correlación entre el origen de la muestra, las especies presentes y la capacidad de producir
micotoxinas; el manejo de la muestra, las especies presentes y la capacidad de producir micotoxinas; y la
etapa de procesamiento de las muestras, las especies presentes y la capacidad de producir micotoxinas.
Se determinó el contenido de Ocratoxina A y se estudió la relación entre origen y manejo de la muestra y
el contenido de micotoxinas en los granos.
Palabras Claves:
Aspergillus, inocuidad, micotoxinas, aflatoxinas, ocratoxinas, Geotrichum, Penicillium,
Rhizopus.
Incidence and distribution of filamentous fungi during the wet milling process of coffee.
Coffee is
one of the most traditionally consumed beverages worldwide. It can be contaminated by a wide variety of
microorganisms during growth and processing, among which filamentous fungi can be found. In this work
we identified species present throughout the wet milling process. We analyzed the correlation between
origin of the sample, species present and ability to produce mycotoxins; management of the sample, spe-
cies present and ability to produce mycotoxins; and stage of processing, species present and ability to
produce mycotoxins. We also determined the content of Ochratoxin A and studied the relationship be-
tween the origin and management of the sample and the content of mycotoxins in the beans.
Keywords: Aspergillus, safety, mycotoxins, aflatoxins, ochratoxins, Geotrichum, Penicillium, Rhizopus.
es remover la pulpa, el mucílago, el pergami- no y la película plateada que rodean la semilla El café es una de las bebidas más tradicio- para la obtención del grano limpio conocido nales en el mundo, e ingrediente de una gran como café oro (Batista et al. 2009). La con- cantidad de alimentos. Su calidad está condi- taminación microbiana puede ocurrir a lo cionada por una serie de factores entre los que largo del cultivo, el procesamiento el almace- se incluyen variedad, condiciones climáticas, namiento y la vida de anaquel de los granos. método de cultivo, procesamiento y almace- La acción microbiana opera en detrimento de namiento (Batista et al. 2009; Soliman 2005). la calidad e inocuidad del producto final; ella El objetivo del proceso de beneficio del café depende principalmente de factores ambienta- Steviana, Vol. 6, 2104, pp. 13 - 19 Recibido 3 julio 2014; aceptado 6 octubre 2014 Steviana Vol. 6. 2014. Arrua A. et al. Incidencia y distribución de hongos filamentosos durante el proceso de beneficio húmedo del café les que se dan durante el cultivo y almacena- de presuponer que los aislados obtenidos miento del producto (Batista et al. 2003; So- tendrán potencial para producir micotoxinas liman 2005; Perrone et al. 2007; Almeida que contaminen el café. En este trabajo se et al. 2007). Bacterias y hongos filamentosos estudió la incidencia de hongos presentes a lo han sido reportados en pulpa y granos de café largo del proceso de beneficio húmedo de los procesados en países productores y consumi- granos en cuatro fracciones, a mitad del pro- dores de café, por lo cual, la acumulación de ceso de secado y en café seco. micotoxinas representa un riesgo constante (Almeida et al. 2007; Magnoli et al. 2007; MATERIALES Y MÉTODOS
Luna, Lozada, y Trigos 2010). La principal preocupación de estos reportes son las mico- Colecta de muestras toxinas, metabolitos secundarios tóxicos de Se colectaron 25 submuestras de 250 gra- ciertas especies de hongos, que producen en mos cada una de la cosecha del día de la va- seres humanos y animales síndromes llamados riedad Oro Azteca (Coffea arábica), de dos
micotoxicosis. Son neuro y nefrotóxicas, on- puntos en el Estado de Veracruz: Teocelo cogénicas, teratogénicas, y afectan a los sis- (manejo convencional, con uso de productos temas inmunológico, neurológico y respirato- fitosanitarios) e Ixuatlán del Café (manejo rio (Perrone et al. 2007; Arrúa Alvarenga, orgánico, sin aplicación de productos fitosani- Moura Mendez y Fernández Ríos, 2013). En tarios). Café de altura, en ambos casos, bajo el café se ha reportado frecuentemente la pre- sombra boscosa. Una vez etiquetadas y emba- sencia de ocratoxina A (OTA), aflatoxinas ladas de forma adecuada, en bolsas de papel (AF) y patulina (PAT) (Magnoli et al. 2007; madera y embaladas en cajas, las muestras Luna, Lozada, y Trigos 2010). Debido a que fueron transportadas al Laboratorio de Parasi- durante el proceso de beneficio el café es tología Molecular de la UAAAN, en Buena- transformado a través de la exposición a una vista, Coahuila, donde fueron procesadas serie de condiciones diferentes de humedad y según el sistema de beneficio húmedo del café temperatura que predisponen a la aparición de 24 horas después de la toma de muestras. En microorganismos, especialmente hongos fila- el estado de Coahuila fue realizado todo el mentosos, la acumulación de micotoxinas trabajo posterior a la toma de muestras. representa un riesgo constante. Especies del género Aspergillus, incluyendo A. niger, A. Aislamiento e identificación de hongos flavus, A. ochraceus y Penicillium han sido reportadas como las aisladas con mayor fre- Se estudió la incidencia de hongos presen- cuencia en las muestras de café (Almeida tes luego de la finalización del proceso de et al. 2007; A. P. Magnoli et al. 2008; Batista fermentación, a los seis días de secado, a los et al. 2009; Luna, Lozada y Trigos 2010). 12 días de secado en pista de cemento y en Considerando todo lo anteriormente expuesto, café oro. Los granos fueron desinfestados con la presente investigación se realizó con el hipoclorito de sodio al 1% siguiendo el proto- objetivo de determinar la presencia de hongos colo de Batista et al. (2003). Posteriormente potencialmente micotoxigénicos asociados al diez granos fueron sembrados por triplicado proceso de beneficio húmedo del café. La en placas de Petri con PDA (papa dextrosa identificación de la micobiota es fundamental agar) y MSA60% (malta sal agar 60 gramos para determinar el potencial y la habilidad de por litro de medio de cultivo). Se incubaron a los aislados de producir micotoxinas. Se pue- 27 °C y luz constante por siete días. Todas las Steviana Vol. 6. 2014. Arrua A. et al. Incidencia y distribución de hongos filamentosos durante el proceso de beneficio húmedo del café colonias fueron identificadas a nivel de género entre la incidencia de hongos presentes y la por medio de la observación de características etapa del proceso, por medio del coeficiente macro y microscópicas y el uso de claves taxonómicas (Barnett y Hunter 1998). Los resultados de la micobiota se expresaron como RESULTADOS Y DISCUSIÓN

porcentaje de hongos presentes en las distintas En las muestras analizadas se identifica- partes del grano y etapa de procesamiento del ron: Aspergillus flavus, Aspergillus glaucus, café, en el pergamino, exocarpo, endocarpo y Aspergillus niger, Geotrichum sp., Penici- endospermo de los granos (Marasas y Nelson llium sp. y Rhizopus sp. en PDA y Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Aspergi- Identificación de hongos potencialmente llus carbonarius, Aspergillus glaucus, Geotri- micotoxigénicos chum sp., Penicillium sp. y Rhizopus sp. en MSA60% (Tabla 2). En MSA se observó una Todos los hongos con características ma- mayor diversidad de especies presentes pro- croscópicas consistentes con los géneros As- bablemente debido a que al retener agua como pergillus fueron purificados en Czapek agar. consecuencia de la presencia de sal en su Se realizaron cultivos monoconidiales por constitución, permite el crecimiento de espe- medio de diluciones seriadas, que se identifi- cies con necesidades de agua inferiores (Maz- caron por medio del uso de claves taxonómi- zani, Luzón and Chavarri 2007). Los hongos cas (Samson and Pitt 2000; Klich 2002; identificados coinciden con lo reportado en Abarca et al. 2004; Samson et al. 2007). trabajos anteriores, siendo los de género As- pergillus, Secciones Nigri y Flavi, los más Cuantificación de micotoxinas y determi- frecuentemente aislados. El objetivo fue iden- nación de potencia toxigénica tificar Aspergillus de las Secciones Flavi y La cuantificación de AF y OTA en café Nigri dada su alta frecuencia de aparición en pergamino y verde se realizó en el Laborato- granos de café y su capacidad de producción rio de la Unidad de Granos y Semillas de las de micotoxinas, especialmente OTA y AF Escuela de Postgrado en Cuautitlán Izcali, (Abarca et al. 2004; Horn 2007). Estado de México, utilizando los kits Aflatest Se observaron diferencias significativas en y Ochratest de Vicam Technologies (Vicam cuanto a la incidencia de hongos presentes en 1999a; Vicam 1999b). Las cepas de la Sec- PDA y MSA60%. Rhizopus sp. fue el hongo ción Flavi además fueron sembradas en Agar con mayor incidencia de aislamiento tanto en Coco para su observación bajo luz ultravioleta PDA como en MSA; a pesar de ser considera- (Davis, Iyer and Diener 1987). do como un contaminante de poca importan- cia dado que no es productor de micotoxinas Análisis estadístico al crecer y desarrollarse sobre los granos, produce diversos metabolitos asociados a El diseño estadístico fue completamente al estos procesos. Además, la liberación de agua azar. Se estudió el porcentaje de incidencia de y gases producto de su respiración aumentaría cada hongo a lo largo del proceso de beneficio el contenido de humedad del grano, lo que húmedo del café. Se realizó un ANAVA con podría posibilitar la contaminación con otros el uso del Test LSD Fisher. Se analizó además microorganismos secundarios. Una alta inci- la correlación entre la incidencia de hongos dencia de Rhizopus sp. podría además indicar presentes y la parte del grano analizada, y Steviana Vol. 6. 2014. Arrua A. et al. Incidencia y distribución de hongos filamentosos durante el proceso de beneficio húmedo del café deficiencias en el proceso de secado del gra- PDA. Sin embargo en MSA 60% las diferen- cias fueron significativas; esto podría deberse a que MSA 60% permite el crecimiento de Tabla 1. Incidencia de hongos filamentosos en el proceso de beneficio húmedo de café en PDA. especies con menores necesidades de agua, y a que el crecimiento de los hongos aflatoxigé- nicos y ocratoxigénicos está condicionado por factores de pH, humedad y actividad del agua Geotrichum sp. (Spadaro et al. 2010). Aspergillus flavus En lo que respecta a las etapas del proceso de beneficio, en PDA se observaron diferen- Aspergillus glaucus cias significativas entre partes del grano y días Aspergillus niger de secado. La incidencia de hongos filamento-sos fue menor a medida que el grano dismi- Penicillium sp. nuyó su contenido de humedad. En el perga-mino que rodea a la semilla se observó una Rhizopus sp. alta contaminación por Rhizopus sp. en la Medias con una letra en común no son significativamen- primera etapa de secado, probablemente debi- te diferentes (p > 0,05). do a su elevado contenido de humedad; la Tabla 2. Incidencia de hongos filamentosos en el incidencia más alta de patógenos se dio en el proceso de beneficio húmedo de café en MSA60%. pergamino del grano a los seis días de secado. En MSA 60% también se presentaron diferen- cias significativas al analizar las diversas eta- Aspergillus carbonarius pas del proceso de beneficio húmedo. Coinci-dentemente con lo obtenido en PDA, la mayor Geotrichum sp. contaminación se dio en el pergamino a los seis días de secado. Esto podría deberse a que Aspergillus glaucus el pergamino es la capa más externa que rodea Aspergillus niger al grano y por tanto sufre mayor exposición a las condiciones del ambiente y hongos conta- Penicillium sp. minantes secundarios. El pergamino de café se encuentra princi- Aspergillus flavus palmente constituido por fibras, proteínas y Rhizopus sp. grasas, por tanto es sustrato propicio para el crecimiento de hongos saprófitos. Medias con una letra en común no son significativamen-te diferentes (p > 0,05). Se ha indicado que las mayores contami- naciones en el grano de café se producen en No se observaron diferencias significativas su parte externa, siendo la contaminación en cuanto al origen de la muestra (Teocelo o interna hasta un tercio inferior (Batista et al. Ixuatlan) y la incidencia de los diferentes hongos presentes a lo largo del proceso de Al estudiar los factores que podrían in- beneficio húmedo en PDA. Tampoco se ob- fluenciar a la micobiota durante el proceso de servaron diferencias significativas en cuanto beneficio húmedo no se observó correlación al sistema de manejo de la muestra (conven- entre la incidencia de los hongos filamentosos cional en Teocelo y orgánico en Ixualtán) en Steviana Vol. 6. 2014. Arrua A. et al. Incidencia y distribución de hongos filamentosos durante el proceso de beneficio húmedo del café Tabla 3. Incidencia de hongos filamentosos durante el proceso de beneficio húmedo del café. Etapa del proceso
Etapa del proceso
Pergamino 12 días de secado Endocarpo 6 días de secado Endocarpo 12 días de secado Pergamino 12 días de secado Endospermo 12 días de seca- Endospermo 12 días de seca- Post fermentación Endocarpo 12 días de secado Endocarpo 6 días de secado Endospermo 6 días de secado Endospermo 6 días de secado Post fermentación Pergamino 6 días de secado C Pergamino 6 días de secado Medias con una letra en común no son significativamente diferentes ((p > 0,05). presentes con respecto a su origen geográfico, En cuanto a OTA en Teocelo se detectaron manejo y etapa del proceso de beneficio en niveles promedio de 1,73 ppm en café perga- PDA ni en MSA60%. mino y 0,8 ppm en café verde. En Ixuatlán, Es importante destacar que la contamina- 0,79 y 0,49 respectivamente, lo que indica ción microbiana puede ocurrir desde la cereza menor contenido de OTA en café orgánico. La hasta la finalización del proceso de beneficia- diferencia en estos valores, en cuanto a conte- do húmedo del café. Al identificar los diferen- nido absoluto de OTA podría deberse a que en tes tipos de hongos filamentosos presentes a los cafetales manejados orgánicamente se lo largo del proceso de beneficio húmedo y utilizaron bioproductos a base de Bacillus sp. tomar acciones encaminadas a la reducción de y Trichoderma sp. Estos organismos poseen aquellos potencialmente micotoxigénicos, se diferentes mecanismos para competir con asegura la calidad e inocuidad del producto otros hongos, entre ellos los productores de final (Bucheli y Taniwaki 2002; Batista et al. micotoxinas. A pesar de estos valores, no se observaron diferencias estadísticamente signi- Finalmente, se cuantificó el nivel de AF y OTA en café pergamino y verde. En las mues- tras analizadas no se detectó la presencia de AF a pesar de la importante incidencia de hongos de la Sección Flavi. Sorprendentemen- Durante el proceso de beneficio húmedo te los resultados difieren de lo reportado por del café tanto en cafetales de manejo conven- Nakajima et al. (1997) y Soliman (2002), cional como orgánico se observó la presencia quienes cuantificaron niveles de AF variables de siete especies de hongos filamentosos, en hasta 75% de las muestras analizadas en entre ellas especies potencialmente micotoxi- café verde. La ausencia de AF en las muestras genicas: Aspergillus flavus, Aspergillus niger de grano analizado podría explicarse por el y Penicillium sp. No se encontró relación hecho de que en café existen ciertos compues- entre el origen de la muestra, el tipo de mane- tos, como diterpenos, cafeína y taninos, que jo y las especies de hongos presentes. Tampo- tienen acción protectora contra las AF (Cavin co se pudo determinar la presencia de correla- et al. 1998; Hasan 1999). Otro aspecto llama- ción entre la acumulación de OTA y el mane- tivo es que en 100% de los aislamientos de A. jo y origen de la muestra. No se detectó la flavus sembrados en Agar Coco se observó presencia de AF en los granos de café estu- fluorescencia bajo luz ultravioleta, lo que diados, de acuerdo a las condiciones de este indica de manera cualitativa su potencial pro- estudio. Aun así, no existen diferencias signi- ficativas al analizar los datos estadísticamente. Steviana Vol. 6. 2014. Arrua A. et al. Incidencia y distribución de hongos filamentosos durante el proceso de beneficio húmedo del café Es importante profundizar estudios sobre mi- Cavin, C., D. Holzhäuser, A. Constable, A. C. cotoxinas en café en México, sobre todo aque- Huggett, y B. Schilter. 1998. «The Coffee- llos destinados a la identificación de puntos Specific Diterpenes Cafestol and Kahweol críticos de contaminación a lo largo de la ca- Protect against Aflatoxin B1-Induced dena productiva y así prevenir la ocurrencia Genotoxicity through a Dual Mechanism.» Carcinogenesis 19 (8): 1369-75. Davis, N. D., S. K. Iyer, y U. L. Diener. 1987. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
«Improved Method of Screening for Aflatoxin with a Coconut Agar Medium». Abarca, M. L., F. Accensi, J. Cano, y F. J. Applied and Environmental Microbiology Cabañes. 2004. «Taxonomy and Signifi- 53 (7): 1593-95. cance of Black Aspergilli». Antonie van http://aem.asm.org/content/53/7/1593. Leeuwenhoek 86 (1): 33-49. Hasan, H. A. H. 1999. «Role of caffeine and Almeida, A. P., J. de Alaburda, L. Shundo, V. tannin in anti-toxigenic properties of cof- Ruvieri, S. A. Navas, C. A. Leda Lamar- fee and tea». Cryptogamie Mycologie 20 do, y M. Sabino. 2007. «Ochratoxin A in brazilian instant coffee». Brazilian Journal 1584(99)80004-9. of Microbiology 38 (2): 300-303. Arrúa Alvarenga, A. A., J. Moura Mendez, y Aspergillus section Flavi in the United D. Fernández Ríos. 2013. «Aflatoxins, a States: A review». Food Additives & Con- Real Risk». Reportes Cientificos de la taminants 24 (10): 1088-1101. FACEN 4 (1): 68-81. Klich, M. A. 2002. Identification of Common Barnett, H. L., and B. B. Hunter. 1998. Illus- Aspergillus Species. New Orleans, Louisi- trated genera of imperfect fungi. 4.a ed. St. ana USA: United States Department of Ag- Paul, Minn: APS Press. riculture Agricultural Research Service, Batista, L. R., S. M. Chalfoun, G. Prado, R. Southern Regional Research Center. Freitas Schwan, y A. E. Wheals. 2003. Luna, M., y Lozada, y A. Trigos. 2010. «Ais- «Toxigenic fungi associated with pro- lamiento de cepas de Aspergillus niger, cessed (green) coffee beans (Coffea arabi- productoras de ocratoxina A, en café verde ca L.)». International Journal of Food Mi- (Coffea arabica) almacenado». Revista crobiology 85 (3): 293-300. mexicana de micología 32 (diciembre): 63- Batista, L. R., S. M. Chalfoun, C. Ferreira Silva, M. Cirillo, E. Azevedo Varga, and Magnoli, A. P., L. Tallone, C. A. R. Rosa, A. R. Freitas Schwan. 2009. «Ochratoxin A in M. Dalcero, S. M. Chiacchiera, y R. M. coffee beans (Coffea arabica L.) processed by dry and wet methods». Food Control 20 bentonites as detoxifier of broiler feed con- taminated with aflatoxin». Applied Clay Bucheli, P., y M. H. Taniwaki. 2002. «Re- Science 40 (1–4): 63-71. search on the origin, and on the impact of Magnoli, C., A. Astoreca, M. L. Ponsone, M. post-harvest handling and manufacturing G. Fernández-Juri, C. Barberis, y A. M. on the presence of ochratoxin A in coffee». Dalcero. 2007. «Ochratoxin Food Additives and Contaminants 19 (7): Aspergillus section Nigri in peanut seeds at different months of storage in Córdoba, Steviana Vol. 6. 2014. Arrua A. et al. Incidencia y distribución de hongos filamentosos durante el proceso de beneficio húmedo del café Argentina». International Journal of Food Aspergilli». Studies in Mycology 59 (1): Microbiology 119 (3): 213-18. Marasas, W. F. O., y P. E. Nelson. 1987. Samson, R. A., y J. I. Pitt, eds. 2000. Integra- Mycotoxicology: Introduction to the My- tion of Modern Taxonomic Methods For cology, Plant Pathology, Chemistry, Toxi- Penicillium and Aspergillus Classification cology, and Pathology of Naturally Occur- Integration of Modern Taxonomic Methods ring Mycotoxicoses in Animals. Edinburgh: For Penicillium and Aspergillus Classifi- Pennsylvania State University Press. cation. Amsterdam: CRC Press. Mazzani, C., O. Luzón, y M. Chavarri. 2007. Soliman, K. M. 2002. «Incidence, Level, and «Aspergillus flavus asociado a Epitragus Behavior of Aflatoxins during Coffee Bean sp. (Coleoptera: Tenebrionidae) en maíz Roasting and Decaffeination». Journal of bajo riego en Turén, estado Portuguesa, Agricultural and Food Chemistry 50 (25): Venezuela». Entomotropica 19 (3): 157- ———. 2005. «Effect of variety, locality and Nakajima, M., H. Tsubouchi, M. Miyabe, y Y. processing of coffee beans on thedetection Ueno. 1997. «Survey of aflatoxin B1 and and determination of aflatoxins». Interna- ochratoxin A in commercial green coffee tional Journal of Agriculture and Biology beans by high‐performance liquid chroma- 7 (1): 5-10. http://agris.fao.org/agris- tography linked with immunoaffinity chromatography». Food and Agricultural Immunology 9 (2): 77-83. Spadaro, D., A. Lorè, A. Garibaldi, y M. L. Perrone, G., A. Susca, G. Cozzi, K. Ehrlich, J. Gullino. 2010. «Occurrence of ochratoxin Varga, J. C. Frisvad, M. Meijer, P. A before bottling in DOC and DOCG Noonim, W. Mahakarnchanakul, y R. A. wines produced in Piedmont (Northern Ita- ly)». Food Control 21 (9): 1294-97. Aspergillus species in some important ag- Vicam. 1999a. OchraTest Instruction Manual. ricultural products». Studies in Mycology Watertown, MA: Vicam. ———. 1999b. Aflatest Instruction Manual. Samson, R. A., P. Noonim, M. Meijer, J. Watertown, MA: Vicam. Houbraken, J. C. Frisvad, y J. Varga. 2007. «Diagnostic Tools to Identify Black Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y
anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis


Juliana Moura Mendes Arrua1,2, Fillipe de Oliveira Pereira 3, Felipe Queiroga Sarmento Guerra 2, Everar-
do Albuquerque Menezes4, Francisco Afrânio Cunha 4, Edeltrudes Oliveira Lima 2.
1Centro Multidisciplinario de Investigaciones Tecnológicas, Dirección General de Investigación Científi-
ca y Tecnológica, Universidad Nacional de Asunción – CEMIT, DGICT, UNA, Paraguay.
2Departamento de Ciencias Farmacéuticas, Centro de Ciencias de la Salud, Universidad Federal de Paraí-
ba – UFPB, Brasil.
3Centro de Ciencias y Educación, Universidad Federal de Campina Grande – UFCG, Brasil.
4Departamento de Análisis Clínicas, Universidad Federal do Ceará – UFC, Brasil.
E mail del autor:
Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas
de Candida tropicalis
. Candida tropicalis es una de las especies de Candida no-albicans más prevalen-
tes en infecciones del torrente sanguíneo. Muchas especies del género Candida han exhibido resistencia
a los antifúngicos utilizados en tratamiento. Los aceites esenciales se han presentado como alternativa
debido a su potencial actividad antifúngica. El aceite esencial de Eugenia caryophyllata es utilizado en la
medicina tradicional como antinflamatorio, analgésico, antipirético y antifúngico. Con el objetivo de corro-
borar esta última propiedad terapéutica y buscar nuevas alternativas para el tratamiento antifúngico, se
evaluó la actividad antifúngica del clavo de olor solo y asociado con anfotericina B sobre cepas de Candi-
da tropicalis
. En concentraciones de 512 y 1024 µg/mL se observó inhibición de la formación de pseudohi-
fas y desarrollo de blastoconidios con morfología alterada. El aceite esencial mostró actividad fungicida
dependiente de la concentración, y asociada a la anfotericina B presentó efecto aditivo. Los resultados de
este trabajo son prometedores, pero son necesarios más estudios para elucidar el mecanismo de acción.
Palabras claves:
Candidiasis, efecto aditivo, antifúngico, medicina tradicional, fungicida
In vitro Combination of Essential oil of Eugenia caryophyllata Thunb and amphotericin B on strains
of Candida tropicalis.
Candida tropicalis is one of the most prevalent Candida non-albicans species in
bloodstream infections. Many Candida species have shown resistance to antifungal agents used in treat-
ment. Essential oils have been presented as an alternative due to their potential antifungal activity. The
essential oil of Eugenia caryophyllata is used in traditional medicine as an anti-inflammatory, analgesic,
antipyretic and antifungal. In order to test for the latter therapeutic property and search for new antifungal
treatment alternatives, antifungal activity of clove oil was evaluated alone and associated with amphoteri-
cin B on strains of Candida tropicalis. At concentrations of 512 and 1024 µg/mL inhibition of pseudohyphal
formation and development of blastoconidia with altered morphology were observed. The essential oil
showed concentration-dependent fungicidal activity, and additive effect in association with amphotericin B .
The results of this study are promising, but further studies are necessary to elucidate the mechanism of
action.
Keywords:candidiasis, additiveeffect, antifungal, traditional medicine, fungicidal
es una de las especies de Candida no-albicans más prevalente, principalmente en América Latina (Pfaller et al. 2000). C. albicans, C. glabrata, C. parapsilosis, En América del Sur y específicamente en C. tropicalis y C. krusei son responsables el Brasil, Candida tropicalis se encuentra alrededor del 95% de las infecciones invasivas como el tercer agente más frecuente aislado producidas por hongos del género Candida en infecciones del torrente sanguíneo (infec- (Pfaller y Diekema 2010). Candida tropicalis ciones sistémicas, candidemias) (Pfaller et al. Steviana, Vol. 6, 2104, pp. 20 - 35 Recibido 7 julio 2014; aceptado 8 setiembre 2014 Steviana Vol. 6. 2014. Moura et al. Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis 2000; Godoy et al. 2003; Antunes et al. 2004; Rex, and Cohen, 2003; Tan et al. 2008; Negri Almirante et al. 2005; Cheng et al. 2005; Colombo, Nucci y Park 2006; Nucci y Las limitaciones en el tratamiento ha indu- Colombo 2007; Silva et al. 2011) cido el uso de terapéutica antifúngica combi- Según el agente etiológico, la mortalidad nada, especialmente en pacientes críticos y asociada a C. albicans varia de 25 a 45% en como alternativa se han estudiado muchas diferentes estudios, mientras tanto, cuando se combinaciones de antifúngicos comerciales y refiere a C. tropicalis, dichos porcentajes var- productos naturales (Nishi et al. 2009; ían entre 40 a 60% (Pappas, Rex y Lee 2003; Mukherjee et al. 2005; Wagner 2005; Rosato Nucci y Colombo 2007). et al. 2008; Amber et al. 2010; Saad et al. C. tropicalis presenta considerable poten- 2010; Coutinho et al. 2009; Wagner 2011). cial biológico como agente oportunista en Históricamente, entre los productos natura- paciente con cáncer, leucemia y neutropenia les los extractos vegetales y en especial los (Wingard 1995; Nucci et al. 1998; Almirante aceites esenciales, han se destacado por sus et al. 2005; Nucci y Colombo 2007; Silva et múltiples usos y propiedades en la medicina al. 2011). Al contrario de C. albicans, la de- popular: antiviral, analgésica, antimicrobiana, tección de C. tropicalis está frecuentemente cicatrizante, expectorante, relajante, anti- asociada con el desarrollo de infecciones fúngicas sistémicas, entretanto diversos de- (Nascimento et al. 2007; Park et al. 2007; terminantes de virulencia son compartidos Singh, Baghotia y Goel 2012). entre las dos especies (Zaugg y Zepelin 2001; Dichos conocimientos sirvieron de base Negri et al. 2012) para muchos trabajos científicos, los cuales Cabe resaltar la existencia de aislados de confirmaron la notable actividad antifúngica Candida con resistencia in vitro e in vivo a que los aceites esenciales presentan, entre antifúngicos de uso común destacándose es- ellos: Cinnamomum zeylanicum, Citrus limon, pecies de Candida no-albicans, a las que du- Eucalyptus citriodora, Eugenia uniflora L., rante mucho tiempo no se les dio importancia Peumus boldus, Rosmarinus officinialis, Zin- pero que en los últimos años ha crecido la giber officinale, Eucalyptus globulus, Cymbo- evidencia acerca de la virulencia e importan- pogon winterianus, Thymus vulgaris, y sus cia de dichas especies (Silva et al. 2011; fitoconstituyentes eugenol y carvacrol (Chami Nucci y Colombo 2007). et al. 2004; Silva et al. 2012; de O. Lima et al. Especies como C. krusei y C. glabrata pre- 2006; Bansod y Rai 2008; Castro y Lima sentan resistencia intrínseca al fluconazol, sin 2010; Oliveira et al. 2011; Pereira et al. 2011; embargo, C. tropicalis y C. lusitaneae, tam- de Lira Mota et al. 2012; Lima et al. 2013; de bién han presentado una progresiva resistencia Oliveira Pereira, Mendes, y de Oliveira Lima a dichos antifúngicos. A pesar de presentar varios efectos adversos, algunos relacionados Shin y Lin, 2004, determinaron la activi- con la infusión (agudos) como: náuseas, dad antifúngica de diferentes aceites esencia- vómitos, fiebre, mialgias etc.; y otros relacio- les sobre cepas de Trichophyton, en donde se nados con las dosis (crónicos): anemia y falla destacó el fuerte sinergismo entre Pelargo- renal, la anfotericina B continua siendo el nium graveolens y ketoconazol sobre cepas de tratamiento de elección para los casos de can- T. erinacei, T. schoenleinii y T. soudanense. didiasis sistémicas (Ostrosky-Zeichner, Marr, Un efecto semejante se observó cuando se evaluó la asociación de sus principales consti- Steviana Vol. 6. 2014. Moura et al. Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis tuyentes: geraniol y citronelol con ketocona- Pokorný 2006), anti-carcinogénico (Lee y zol, especialmente contra T. soudanense y T. Shibamoto 2001), insecticida (Yang, Lee, schoenleinii. Lee, Choi y Ahn 2003) y repelente de mosqui- En 2008, Rosato y colaboradores demos- tos (Trongtokit, Rongsriyam, Komalamisra y traron el efecto sinérgico de la asociación de Apiwathnasorn 2005). Además es muy utili- los aceites esenciales de Melaleuca alternifo- zado en la gastronomía (Milind et al. 2011). lia, Origanum vulgare, Pelargonium graveo- Dada la importancia de los aceites esencia- lens con la anfotericina B sobre once cepas de les, en especial las especias que pueden ser C. albicans. Además, la asociación entre P. utilizadas como alimentos funcionales y la gravelens y anfotericina B se mostró prome- escasa información sobre sus usos, resulta interesante aumentar el conocimiento sobre su Amber et al. (2010) analizó la interacción potencial actividad antifúngica, buscando el del aceite esencial de Ocimum sanctum con equilibrio entre la aceptabilidad y la eficacia fluconazol y ketoconazol sobre cepas de C. antimicrobiana (Frutuoso et al. 2013; Burt albicans, C. tropicalis y C. parapsilosis sen- sibles y resistentes a fluconazol. De las 74 Por todo lo expuesto, los objetivos de este cepas estudiadas, en apenas 11 cepas no se trabajo fueron evaluar el efecto de la asocia- observó sinergismo. ción del aceite esencial de E. caryophyllata y El aceite esencial de clavo de olor (cravo la anfotericina B sobre cepas de C. tropicalis, da índia) proviene de botones florales, de las observar la acción de dicho aceite sobre la hojas y troncos del árbol de Syzygium aroma- micromorfología y viabilidad fúngica y de- ticum (Oriente), Eugenia caryophyllata, Eu- terminar el tipo de actividad antifúngica. genia aromaticum (ocidente) o Eugenia car- yophyllus. Existen apenas pequeñas diferen- MATERIALES Y MÉTODOS
cias morfológicas entre estas especies, como presencia y ausencia de pilosidades, pudiendo Productos testados: Aceite esencial (AE) ser consideradas esencialmente la misma. de Eugenia caryophyllata Thunb. (Cravo da Además muchos autores citan que son sinó- índia, clavo de olor), que fue adquirido de nimos (Schmid 1972; Burt and Reinders 2003; FERQUIMA Ind. y Com./São Paulo y la anfo- Daniel et al. 2009; Milind, Article, y Deepa tericina B de Sigma-Aldrich®. El aceite esen- 2011; Singh et al. 2012) cial fue analizado previamente por cromato- El aceite esencial de Eugenia caryophylla- grafía gaseosa y se determinó que el principal ta Thunb. es ampliamente utilizado y conoci- fitoconstituyente es el eugenol, representando do por sus propiedades farmacológicas: acti- 74,2 %, seguido por el humuleno en un 9,9% vidad antibacteriana (Cai y Wu 1996; (Mendes et al. 2012). Kouidhi, Zmantar y Bakhrouf 2010; Kalemba Cepas Fúngicas: Se utilizó una cepa están- y Kunicka 2003; Chaieb y Hajlaoui 2007), dar de Candida tropicalis ATCC 13803 pro- actividad antifúngica (Bansod y Rai 2008; veniente del Laboratorio de Micología de la Gayoso et al. 2005; Trajano et al. 2009; Singh Universidad Federal de Paraíba y cepas clíni- et al. 2012), antiviral (Chaieb y Hajlaoui, cas aisladas de sangre CT 01 y CT 05. 2007; Kurokawa et al. 1998), como anestésico (Altun, Hunt y Usta 2006; Seol et al. 2007), Efecto de aceite esencial y anfotericina B antioxidante (Jirovetz et al. 2007; Chaieb y sobre la micromorfología de C. tropicalis: Hajlaoui 2007; Yanishlieva, Marinova y Steviana Vol. 6. 2014. Moura et al. Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis Se utilizó la técnica de micromorfología de Cuando hubo una reducción menor que levadura, utilizando el medio de cultivo agar- 99,9% o de 3log10 de UFC/mL en compara- arroz en cámara húmeda (Sidrim y Rocha ción al control se consideró que el aceite tiene 2004). Las emulsiones de aceite esencial y efecto fungistático; si la reducción fue mayor anfotericina B equivalentes a la concentración o igual a 99,9% o 3log10 se atribuye al AE inhibitoria mínima – CIM y CIMx2 (512 y actividad fungicida, o sea, que tiene la capaci- 1024 µg/mL, 2 y 4 µg/mL, respectivamente) dad de matar microorganismos, al contrario de fueron agregadas al el medio de cultivo fundi- lo anterior que apenas inhibe el crecimiento do sobre un porta objeto estéril. Después de (Correa-Royero, Tangarife, Durán, Stashenko solidificado, se sembró la cepa en dos estrías y Mesa-Arango 2010; Ernst, Klepser, Wolfe y que fueron cubiertas con cubre objeto estéril. Pfaller 1997; Roling et al. 2002). La placa fue incubada por 24 horas, 35°- 37°C y la preparación fue examinada en microsco- Ensayo de sinergismo - Método checkerboard pio óptico con aumento de 400x para de ob- servar la presencia de estructuras característi- El efecto combinado del AE y el antifúngi- cas como pseudohifas y blastoconidios. co estándar fue determinado a partir de la técnica de checkerboard para la derivación de Actividad del aceite esencial sobre la viabili- índice de Concentración Inhibitoria Fraccio- dad fúngica de C. tropicalis (Time-kill) nada (Índice CIF). La turbidez de las suspen- siones fúngicas fueron comparadas y ajusta- En este ensayo fue observado el compor- das a la presentada por el tubo 0,5 de la escala tamiento de las cepas ATCC 13803 y CT 01, McFarland, la cual corresponde a un inóculo frente a las concentraciones inhibitorias de aproximadamente 106 UFC/mL. mínimas de AE por el método de conteo de Para tal técnica se utilizaron microplacas unidades formadoras de colonias. Al principio de 96 pocillos, en forma de "U". En cada po- fue inoculada 0,5 mL de la suspensión de cillo, inicialmente se agregó 100 µL de medio levaduras en 4,5 mL de caldo Sabouraud con de cultivo líquido Sabouraud Dextrosa, poste- concentraciones variadas de AE (CIM/2; riormente 50 µL de cada producto test en dife- CIM; CIM×2; CIM×4). concentraciones: En los intervalos de 0, 2h, 4h, 8h e 24 h CIM/2, CIM, CIM×2, CIM×4 e CIM×8, sien- después de la incubación, una alícuota de 10 do dispensado en sentido vertical el antifúngi- μL del inóculo fue sembrada de forma uni- co estándar (anfotericina B) y en sentido hori- forme en placas de Petri conteniendo Agar zontal el aceite esencial, originando diferentes Sabouraud Dextrosa. En las mismas condicio- combinaciones entre los dos productos proba- nes también fue analizado un grupo control en la ausencia de aceite esencial y antifúngico Por último se agregó 10 μL de las suspen- siones fúngicas, para lo cual se utilizaron las Las placas inoculadas fueron incubadas a cepas ATCC 13803, CT 01 y CT 05. Las pla- 35-37ºC por 24-48 horas. Después del periodo cas fueron incubadas a 35º-37ºC por 24–48h de incubación, se realizó el conteo de células donde se observó el crecimiento fúngico. El viables, que fue expresado en UFC/mL y pre- ensayo fue realizado por duplicado. sentado en forma del gráfico de la curva de El índice CIF se calculó por medio de la muerte microbiana (Klepser et al. 1998; suma de CIFA + CIFB, A; representa el aceite Klepser et al. 1997). esencial y B, antifúngico estándar. El CIFA se Steviana Vol. 6. 2014. Moura et al. Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis calculó utilizando la relación CIMA combina- paración con el grupo control. Además, se do/ CIMA solo, mientras tanto que CIFB = observó una inhibición de la formación de CIMB combinado/CIMB solo. pseudohifas, alteraciones en la morfología de Este índice se interpretó de las siguientes blastoconidios y formación de vacuolas en las formas de sinergismo: sinergismo (<0,5) efec- células y pérdida de contenido citoplasmático. to aditivo (0,5-1,0) indiferencia (>1 e <4) o La formación de hifas y pseudohifas se antagonismo (>4,0) (Correa-Royero et al., presentan como factores de virulencia expre- 2010; Lewis, Diekema, Messer, Pfaller y sos por hongos de género Candida, que repre- sentan una barrera para la fagocitosis impi- diendo su eliminación del tejido epitelial. Los RESULTADOS Y DISCUSIÓN
cambios en la morfología están asociados a la patogenicidad del microorganismo, además, En estudios realizados previamente se los factores ambientales influyen en el estado determinó la concentración inhibitoria mínima fisiológico de las levaduras comensales, que (CIM) y fungicida mínima (CFM) del aceite se vuelve agente causal de las infecciones esencial de E. caryophyllata: 512 µg/mL y (Romani, Bistoni, y Puccetti 2003; Whiteway 1024 µg/mL, respectivamente. Además, se y Oberholzer 2004). determinó que el eugenol es el principal cons- El AE produjo alteraciones en la morfolog- tituyente del AE en cuestión, lo cual concuer- ía de las células fúngicas análogas a las pro- da con lo encontrado en la literatura (Mendes ducidas por la anfotericina B, que fue utiliza- do como un control positivo, ya que esta es En varios estudios, se demostró que la utilizada en el tratamiento de candidiasis CIM del eugenol, principal fitoconstituyente, sistémicas. De esta manera, se puede atribuir es similar al del aceite esencial de E. caryop- que este AE posee un moderado potencial hyllata, con lo cual se puede atribuir que la antifúngico, ya que fue capaz de inhibir la actividad antimicrobiana de dicho aceite es formación de hifas y pseudohifas. debido al eugenol y también que el fitocom- Con el objetivo de elucidar si el efecto del plejo es tan eficaz como el compuesto aislado, aceite esencial del clavo de olor es fungistáti- que es más caro y difícil de obtenerse (Pinto co o fungicida, dependiente o no de la concen- et al. 2009; Nzeako, Al-Kharousi, y Al- tración y o/tiempo, se realizó la técnica de Mahrooqui 2006; S. Burt 2004). Con el obje- time-kill, muy utilizada en la evaluación de tivo de continuar elucidando el efecto anti- nuevos antimicrobianos (Pfaller, Sheehan y fúngico de E. caryophyllata, se procedió al estudio de la interferencia de dicho AE sobre El AE del clavo de olor mostró efecto la micromorfología de C. tropicalis fungicida (reducción de 99,9%) sobre la cepa Las señales visibles de acción del AE so- CT 01 a concentraciones de 1024 y 2048 bre los hongos, pueden ser observadas por µg/mL, después 4 y 2 horas, respectivamente, medio de las alteraciones morfológicas a nivel como se ve en la figura 2. Sobre la cepa macroscópico y/o microscópico (Kalemba y ATCC 13803 (figura 3), el efecto fungicida Kunicka 2003; Mitchell et al. 2010). En la del AE en las mismas concentraciones se figura 1 se visualizan las alteraciones mor- mostró apenas después de 24 horas. fológicas producidas en la cepa CT 01 luego La anfotericina B que fue utilizada en la del tratamiento con las concentraciones CIM y concentración de 2 µg/mL, correspondiente a CIMx2 del AE y de la anfotericina B en com- la CIM, mostró actividad fungistática sobre Steviana Vol. 6. 2014. Moura et al. Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis las dos cepas, expresando que su actividad ción de 87,5% y 50% en los valores de CIM fungicida es dependiente de la concentración del AE de Clavo de olor y anfotericina B, (Ernst et al. 1997; Klepser et al. 1997). respectivamente. De esta manera, se puede decir que este Como se expresa en la tabla 1, el valor de AE presenta actividad dependiente de su con- índice de CIF (ICIF) fue de 0,6; lo cual indi- centración, o sea, cuando se aumenta su con- can un efecto aditivo de la asociación del AE centración, mejora el efecto, pasando de fun- y la anfotericina B sobre cepas de C. tropica- gistático a fungicida. La actividad fungicida es clínicamente más importante de que la fun- La utilización de combinados de productos gistática, pese a que no depende del sistema naturales y antigúngicos en la clínica es cada inmunológico para resolver la infección. Se vez mayor, lo cual se ve reflejado en el au- debe resaltar que pacientes inmunodeprimidos mento de las publicaciones en los últimos necesitan hacer uso profiláctico de drogas años en el área de investigación con fitofár- fungistáticas, lo cual aumenta la frecuencia macos (Wagner y Ulrich-Merzenich 2009; del consumo de drogas con resistencia innata Amber et al. 2010; de Lira Mota et al. 2012; o adquirida en casos clínicos (Monk y de Oliveira Pereira, Mendes y de Oliveira Además, cabe resaltar que Márquez, 2010 La combinación de compuestos derivados evaluó la citotoxicidad de la fracción hexánica de plantas y antibióticos ya fueron probados del clavo de olor sobre líneas celulares norma- les OK, LLC-PK1 y CHANG en concentra- (Hemaiswarya, Kruthiventi y Doble 2008; ciones de 1000, 100, 10 µgmL, en donde se Amber et al. 2010; Coutinho, Costa, Lima, encontró un alto porcentaje de viabilidad de Falcão-Silva y Siqueira 2009), destacándose las células normales, por encima de 60. la levadura del género Candida (Han 2007; Estos resultados nos estimularon a seguír in- Shin y Pyun 2004; Giordani et al. 2004; Saad vestigando el efecto del aceite esencial de et al. 2010; Silva et al. 2012). Nuestros resultados concuerdan con los es- La sinergia entre los agentes antifúngicos tudios de Shin y Pyun 2004 y Silva et al. ha sido muy utilizada en la clínica médica, 2011, que describieron el efecto aditivo de la siendo evaluado en laboratorio por la técnica asociación de aceites esenciales y antifúngicos de checkerboard, que tiene la ventaja de ser utilizados en la clínica sobre cepas de C. tro- fácil de ejecutar y estandarizar (White et al. 1996; Lewis et al. 2002; Hemaiswarya, Este tipo de asociación puede ampliar los Kruthiventi y Doble 2008) espectros de acción y eficacia de cada droga, Tras a la evaluación del sinergismo entre permitiendo así la utilización de concentra- anfotericina B y el AE de E. caryophyllata ciones menores de cada droga, reduciendo los sobre las cepas clínicas CT 01 y CT 05 y la cepa estándar ATCC 13803 de C. tropicalis se (Cuenca-Estrella 2004; Lewis, Viale y observó la disminución de los valores de CIM Kontoyiannis 2012). para ambos productos testeados: una reduc-


Steviana Vol. 6. 2014. Moura et al. Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis Figura 1: Aspecto microscópico de la C. tropicalis cepa CT 01, utilizando la técnica de microcultivo. 1, 2: control; 3: expuesto a anfotericina B – CIM; 4: expuesto a anfotericina B – CIMx2; 5: expuesto al AE de E. caryophyllata – CIM; 6: expuesto al AE de E. caryophyllata – CIMx2. a: pseudohifas; b: blastoconi-dios. Aumento de 400x. Steviana Vol. 6. 2014. Moura et al. Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis Tiempo (horas)
Figura 2: Viabilidad de las estructuras fúngicas de C. tropicalis CT01 en Log10UFC/mL Tiempo (horas)
Figura 3: Viabilidad de estructuras fúngicas de C. tropicalis ATCC 13803 en Log10UFC/mL Steviana Vol. 6. 2014. Moura et al. Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis Tabla 1. Concentración Inhibitoria Mínima (CIM - μg/mL) e Índice de Concentración Inhibitoria Fraccio-nal (ICIF) después de la combinación del aceite esencial de E. caryophyllata con Anfotericina B sobre cepas de C. tropicalis CT01, CT05 y ATCC 13803. CIM associadas
(µg/mL)
aConcentración Inhibitoria Fraccional; bÍndice CIF
CONCLUSIONES
Altun, T., Hunt, A. Ö., & Usta, F. (2006). Effects of Clove Oil and Eugenol on En base a nuestros resultados, podemos con- Anaesthesia and Some Hematological cluir que el aceite esencial de clavo de olor Parameters of European Eel Anguilla produce importantes alteraciones micromor- anguilla, L., 1758. Journal of Applied fológicas sobre las cepas de C. tropicalis, y que Research, su actividad antifúngica es del tipo fungicida dependiente de la concentración y tiempo, Amber, K., Aijaz, A., Immaculata, X., además que su asociación con el antifúngico de Luqman, K. a, & Nikhat, M. (2010). elección clínica, en este caso la anfotericina B, Anticandidal effect of Ocimum sanctum expresa un efecto aditivo. De esta forma, este essential oil and its synergy with aceite esencial se presenta como un prometedor producto antifúngico en el tratamiento de la Phytomedicine : International Journal of candidiasis, aunque es necesario dar continui- Phytotherapy and Phytopharmacology, dad a los ensayos para asegurar un futuro uso in Antunes, A. G. V., Pasqualotto, A. C., Diaz, REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
M. C., d'Azevedo, P. A., & Severo, L. C. (2004). Candidemia in a Brazilian tertiary Almirante, B., Rodríguez, D., Park, B. J., care hospital: species distribution and Cuenca-Estrella, M., Planes, A. M., Almela, antifungal susceptibility patterns. Revista M., Pahissa, A. (2005). Epidemiology and Do Instituto de Medicina Tropical de São predictors of mortality in cases of Candida 46652004000500001 population-based surveillance, barcelona, Bansod, S., & Rai, M. (2008). Antifungal Spain, from 2002 to 2003. Journal of activity of essential oils from Indian Clinical Microbiology, 43(4), 1829–1835. pathogenic Aspergillus fumigatus and A. niger. World Journal of Medical Sciences, Steviana Vol. 6. 2014. Moura et al. Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis caused by Candida albicans and non- albicans Candida species. BMC Infectious Burt, S. (2004). Essential oils: their Diseases, 5, 22. doi:10.1186/1471-2334-5- antibacterial properties and potential review. Colombo, A., Nucci, M., Park, B., Nouér, S., International Arthington-Skaggs, B., da Matta, D., … Microbiology, Morgan, J. (2006). Epidemiology of candidemia in Brazil: a nationwide Burt, S. a, & Reinders, R. D. (2003). sentinel surveillance of candidemia in Antibacterial activity of selected plant eleven medical centers. Journal of essential oils against Escherichia coli Microbiology, 36(3), 162–7. Retrieved Correa-Royero, J., Tangarife, V., Durán, C., from Stashenko, E., & Mesa-Arango, A. (2010). In vitro antifungal activity and cytotoxic effect of essential oils and extracts of Cai, L., & Wu, C. D. (1996). Compounds medicinal and aromatic plants against from Syzygium aromaticum possessing Candida krusei and Aspergillus fumigatus. growth inhibitory activity against oral Revista Brasileira de Farmacognosia, pathogens. Journal of Natural Products, 59(10), 987–990. doi:10.1021/np960451q 695X2010005000021 Castro, R. D., & Lima, E. de O. (2010). Coutinho, H. D. M., Costa, J. G. M., Lima, E. Atividade antifúngica in vitro do óleo O., Falcão-Silva, V. S., & Siqueira, J. P. essencial de. Revista de Odontologia Da (2009). Herbal therapy associated with UNESP, 39(3), 179–184. antibiotic therapy: potentiation of the Chaieb, K., & Hajlaoui, H. (2007). The antibiotic activity against methicillin-- chemical composition and biological activity of clove essential oil, Eugenia caryophyllata (Syzigium aromaticum L. Complementary and Alternative Medicine, Myrtaceae): a short review. Phytotherapy 9, 13. doi:10.1186/1472-6882-9-13 , 506(December 2006), 501–506. Coutinho, H. D. M., Costa, J. G. M., Lima, E. doi:10.1002/ptr O., Falcão-Silva, V. S., & Siqueira-Júnior, Chami, N., Chami, F., Bennis, S., Trouillas, J. P. (2009). Potentiating effect of Mentha J., & Remmal, a. (2004). Antifungal arvensis and chlorpromazine in the treatment with carvacrol and eugenol of oral candidiasis in immunosuppressed methicillin-resistant rats. The Brazilian Journal of Infectious aureus. In Vivo (Athens, Greece), 23(2), Diseases : An Official Publication of the Brazilian Society of Infectious Diseases, 86702004000300005 Cuenca-Estrella, M. (2004). Combinations of Cheng, M.-F., Yang, Y.-L., Yao, T.-J., Lin, antifungal agents in therapy–what value C.-Y., Liu, J.-S., Tang, R.-B., … Lo, H.-J. are they? Journal of Antimicrobial …, (2005). Risk factors for fatal candidemia 54(5), 854–69. doi:10.1093/jac/dkh434 Steviana Vol. 6. 2014. Moura et al. Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis Daniel, A. N., Sartoretto, S. M., Schmidt, G., Fitoterapia, Caparroz-assef, S. M., Bersani-amado, C. A., Cuman, R. K. N., & Merr, E. L. Giordani, R., Regli, P., Kaloustian, J., Mikaïl, (2009). Artigo Anti-inflammatory and C., Abou, L., & Portugal, H. (2004). antinociceptive activities Antifungal effect of various essential oils essential oil in experimental animal against Candida albicans. Potentiation of Brazilian antifungal action of amphotericin B by Pharmacognosy, 19(November 2008), essential oil from Thymus vulgaris. Phytotherapy Research, 18(12), 990–5. De Lira Mota, K. S., de Oliveira Pereira, F., doi:10.1002/ptr.1594 de Oliveira, W. A., Lima, I. O., & de Godoy, P., Tiraboschi, I. N., Severo, L. C., Oliveira Lima, E. (2012). Antifungal Bustamante, B., Calvo, B., Almeida, L. P. activity of Thymus vulgaris L. essential De, … Colombo, A. L. (2003). Species oil and its constituent phytochemicals distribution and antifungal susceptibility against Rhizopus oryzae: interaction with profile of Candida spp. bloodstream Molecules isolates from Latin American hospitals. Switzerland), Memórias Do Instituto Oswaldo Cruz, De Oliveira Pereira, F., Mendes, J. M., & de Oliveira Lima, E. (2013). Investigation on mechanism of antifungal activity of Han, Y. (2007). Synergic effect of grape seed eugenol against Trichophyton rubrum. extract with amphotericin B against Mycology, disseminated candidiasis due to Candida albicans. Phytomedicine: International Ernst, M. E., Klepser, M. E., Wolfe, E. J., & Phytotherapy Pfaller, M. a. (1997). Antifungal dynamics Phytopharmacology, 14(11), 733–738. echinocandin B analog, against Candida Hemaiswarya, S., Kruthiventi, A. K., & ssp. Diagnostic Microbiology Doble, M. (2008). Synergism between Infectious Disease, 26(3-4), 125–31. natural products and antibiotics against International Journal of Phytotherapy and Frutuoso, A. E., Teotonio, N., Leda, T., Lemos, G. De, Coelho, E. L., Maria, D., & Jirovetz, L., Buchbauer, G., Schmidt, E., Teixeira, A. (2013). REBRAPA. Revista Stoyanova, A. S., Denkova, Z., Nikolova, Brasileira de Pesquisa Em Alimentos, R., & Geissler, M. (2007). Purity, 4(2), 69–81. Antimicrobial Activities and Olfactoric Gayoso, C. W., Lima, E. O., Oliveira, V. T., Pereira, F. O., Souza, E. L., Lima, I. O., & Various of Their Derivatives. Journal of Navarro, D. F. (2005). Sensitivity of fungi Essential Oil Research, 19(3), 288–291. isolated from onychomycosis to Eugenia cariophyllata essential oil and eugenol. Kalemba, D., & Kunicka, a. (2003). Antibacterial and antifungal properties of Steviana Vol. 6. 2014. Moura et al. Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis Medicinal Chemistry, Chemistry, 10(10), 813–29. Retrieved Lewis, R. E., Diekema, D. J., Messer, S. a, Pfaller, M. a, & Klepser, M. E. (2002). Klepser, M. E., Ernst, E. J., Ernst, M. E., dilution and time-kill studies for the Messer, S. a, & Pfaller, M. a. (1998). detection of synergy or antagonism Evaluation of endpoints for antifungal between antifungal agents tested against LY303366. Antimicrobial Agents and Antimicrobial Chemotherapy, 49(2), 345– Chemotherapy, 42(6), 1387–91. Retrieved Lewis, R. E., Viale, P., & Kontoyiannis, D. P. &rendertype=abstract (2012). The potential impact of antifungal Klepser, M. E., Wolfe, E. J., Jones, R. N., & drug resistance mechanisms on the host Nightingale, C. H. (1997). Antifungal immune response to Candida. Virulence, 3(4), 368–76. doi:10.4161/viru.20746 Fluconazole and Amphotericin B Tested Lima, I. de O., Oliveira, R. de A. G., Lima, E. against Candida albicans. Antimicrobial de O., Farias, N. M. P., & Souza, E. L. De. Agents and Chemotherapy, 41(6), 1392– (2006). Atividade antifúngica de óleos essenciais sobre espécies de Candida. Kouidhi, B., Zmantar, T., & Bakhrouf, A. Brazilian Journal of Pharmacognosy, (2010). Anticariogenic and cytotoxic 16(2), 197–201. activity of clove essential oil (Eugenia Lima, I. O., Pereira, F. de O., Oliveira, W. A. caryophyllata) against a large number of de, Lima, E. de O., Menezes, E. A., oral pathogens. Annals of Microbiology, Cunha, F. A., & Diniz, M. de F. F. M. 60(4), 599–604. doi:10.1007/s13213-010- (2013). Antifungal activity and mode of action of carvacrol against Candida Kurokawa, M., Hozumi, T., Basnet, P., albicans strains. Journal of Essential Oil Nakano, M., Kadota, S., Namba, T., … Research, Shiraki, K. (1998). Purification and Characterization of Eugeniin as an Anti- Márquez, B. P. (2010). Componentes químicos actividad bactericida, japonicum and Syzygium aromaticum. J. fungicida y citotóxica de plantas de la Pharmacol. Exp. Ther., 284(2), 728–735. Myrtaceae Lauraceae. Universidad Autónomas de Nuevo León. Lee, K.-G., & Shibamoto, T. (2001). Antioxidant property of aroma extract Mendes, J. M., Sarmento Guerra, F. Q., isolated from clove buds [Syzygium Oliveira Pereira, F. de, Pereira de Sousa, aromaticum (L.) Merr. et Perry]. Food J., Nogueira Trajano, V., & Oliveira Lima, E. de. (2012). Actividad antifúngica del Steviana Vol. 6. 2014. Moura et al. Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis aceite esencial de Eugenia caryophyllata Diseases, sobre cepas de Candida tropicalis de aislados clínicos. … Latinoamericano Y Negri, M., Silva, S., Henriques, M., & Del …, 11(3), 208–217. Retrieved from Oliveira, R. (2012b). Insights Candida tropicalis nosocomial infections cpma/article/view/621 and virulence factors. European Journal Milind, P., Article, R., & Deepa, K. (2011). of Clinical Microbiology & Infectious Available online through CLOVE : A Diseases, International Journal of Research in Ayurveda & Nishi, I., Sunada, A., Toyokawa, M., Asari, Pharmacy, 2(1), 47–54. S., & Iwatani, Y. (2009). In vitro Mitchell, T. C., Stamford, T. L. M., Souza, E. L. de, Lima, E. de O., & Carmo, E. S. (2010). Origanum vulgare L. essential oil as inhibitor of potentially toxigenic flucytosine against clinical isolates of Aspergilli. Ciência E Tecnologia de Candida species. Journal of Infection and Alimentos, Chemotherapy: Official Journal of the Japan Society of Chemotherapy, 15(1), 1– Monk, B. C., & Goffeau, A. (2008). 5. doi:10.1007/s10156-008-0653-9 to Nucci, M., & Colombo, A. L. (2007a). antifungals. Science (New York, N.Y.), Candidemia due to Candida tropicalis: 321(5887), clinical, epidemiologic, and microbiologic characteristics of 188 episodes occurring in tertiary care hospitals. Diagnostic Christopher, A., Ghannoum, M. A., & Microbiology and Infectious Disease, Hitchcock, C. A. (2005). Combination Treatment of Invasive Fungal Infections Invasive Nucci, M., & Colombo, A. L. (2007b). Fungal Infections. Clinical Microbiology Candidemia due to Candida tropicalis: clinical, epidemiologic, and microbiologic characteristics of 188 episodes occurring Nascimento, P. F. C., Nascimento, A. C., in tertiary care hospitals. Diagnostic Rodrigues, C. S., Antoniolli, Â. R., Microbiology and Infectious Disease, Santos, P. O., Barbosa Júnior, A. M., & Trindade, R. C. (2007). Divulgação óleos Nucci, M., Silveira, M. I., Spector, N., essenciais : uma abordagem multifatorial Silveira, F., Velasco, E., Martins, C. A., métodos. Brazilian Journal of … Pulcheri, W. (1998). Fungemia in Pharmacognosy, 17(1), 108–113. cancer patients in Brazil: Predominance of Negri, M., Silva, S., Henriques, M., & non-albicans species. Mycopathologia, Oliveira, R. (2012a). Insights into Candida virulence factors. European Journal of Nzeako, B. C., Al-Kharousi, Z. S. N., & Al-Clinical Microbiology Infectious Mahrooqui, Z. (2006). Antimicrobial Steviana Vol. 6. 2014. Moura et al. Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis activities of clove and thyme extracts. Journal of Pharmaceutical Sciences, University Journal, 6(1), 33–9. Retrieved from 82502011000100018 Pfaller, M. A., Jones, R. N., Doern, G. V, Sader, H. S., Messer, S. A., and Houston, z&rendertype=abstract A. (2000). Bloodstream Infections Due to Oliveira, W. A. de, Pereira, F. de O., Luna, Candida Species : SENTRY Antimicrobial G. C. D. G. de, Lima, I. O., Wanderley, P. Surveillance Program in North America A., Lima, R. B. de, & Lima, E. de O. and Latin America , 1997-1998, 44(3), Cymbopogon winterianus jowitt ex bor Pfaller, M. A., Sheehan, D. J., and Rex, J. H. against Brazilian (2004). Determination of Fungicidal Journal of Microbiology, 42(2), 433–441. Activities against Yeasts and Molds : Ostrosky-Zeichner, L., Marr, K. a, Rex, J. H., Testing and the Need for Standardization, and Cohen, S. H. (2003). Amphotericin B: time for a new "gold standard". Clinical Infectious Diseases : Official Pinto, E., Vale-Siva, L., Cavaleiro, C., and Publication of the Infectious Diseases Salgueiro, L. (2009). Antifungal activity Society of America, 37(3), 415–25. of the clove essential oil from Syzygium doi:10.1086/376634 aromaticum on Candida , Aspergillus and Pappas, P., Rex, J., and Lee, J. (2003). A dermatophyte species. Journal of Medical Microbiology, 58(The composition and candidemia: epidemiology, therapy, and antifungal activity of clove essential oil influences on mortality in hospitalized adult and pediatric patients. Clinical aromaticum, were studied. Clove oil was Infectious …, 0006, 0–9. Retrieved from obtained commercially and analysed by GC and GC- MS. The EO analysed showed a high content of eugenol (85.3 Park, M., Gwak, K., Yang, I., Choi, W., Jo, H., Chang, J., … Choi, I. (2007). Antifungal Activities of the Essential Oils Roling, E. E., Klepser, M. E., Wasson, A., in Syzygium aromaticum ( L .) Merr . Et Lewis, R. E., Ernst, E. J., and Pfaller, M. Perry and Leptospermum petersonii Baile A. (2002). Antifungal activities of y and their Constituents against Various fluconazole , caspofungin ( MK0991 ), and anidulafungin ( LY 303366 ) alone Microbiology, 45(5), 460–465. and in combination against Candida spp . Pereira, F. de O., Wanderley, P. A., Viana, F. and Crytococcus neoformans via time-kill A. C., Lima, R. B. de, Sousa, F. B. de, methods, 43, 13–17. Santos, S. G. dos, and Lima, E. de O. Romani, L., Bistoni, F., and Puccetti, P. (2011). (2003). Adaptation of Candida albicans to winterianus Jowitt ex Bor essential oil on the host environment: the role of morphogenesis in virulence and survival Trichophyton mentagrophytes. Brazilian in mammalian hosts. Current Opinion in Steviana Vol. 6. 2014. Moura et al. Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis Microbiology, against Candida species and potential Rosato, A., Vitali, C., Gallo, D., Balenzano, Phytomedicine: International Journal of L., and Mallamaci, R. (2008). The Phytotherapy and Phytopharmacology, inhibition of Candida species by selected essential oils and their synergism with Phytomedicine : Silva, S., Negri, M., Henriques, M., International Journal of Phytotherapy and Williams, D. W., and Azeredo, J. (2012). Candida glabrata, Candida parapsilosis Saad, A., Fadli, M., Bouaziz, M., Benharref, A., Mezrioui, N., and Hassani, L. (2010). Federation Phytomedicine Anticandidal activity of European Microbiological Societies, 36, the essential oils of Thymus maroccanus and Thymus broussonetii and their 6976.2011.00278.x synergism with amphotericin B and Singh, J., Baghotia, A., and Goel, S. P. fluconazol. (2012). Eugenia caryophyllata Thunberg ( Integrative Medicine, 17(13), 1057–1060. International Journal of Research in Schmid, R. (1972). A Resolution of the Pharmaceutical and Biomedical Sciences, Eugenia-Syzygium 3(4), 1469–1475. (Myrtaceae). American Journal of Botany, Tan, T., Tan, A., Tee, N., and Ng, L. (2008). 59(4), 423. doi:10.2307/2441553 A retrospective analysis of antifungal Seol, D.-W., Lee, J., Im, S.-Y., and Park, I.-S. susceptibilities of Candida bloodstream (2007). Clove oil as an anaesthetic for isolates from Singapore hospitals. Ann common octopus (Octopus minor, Sasaki). Acad Med Singapore, 37(10), 835–40. Aquaculture Research, 38(1), 45–49. Shin, S., and Pyun, M.-S. (2004). Anti- in Trajano, V. N., Lima, E. de O., Souza, E. L. de, and Travassos, A. E. R. (2009). amphotericin B. Phytotherapy Research: essenciais de especiarias sobre bactérias doi:10.1002/ptr.1573 contaminantes de alimentos. Ciência E Sidrim, J. J. C., and Rocha, M. F. G. (2004). Tecnologia de Alimentos, 29(3), 542–545. Micologia médica à luz de autores contemporâneos 408). Trongtokit, Komalamisra, N., and Apiwathnasorn, C. (2005). Comparative repellency of 38 essential oils against mosquito bites. Silva, F., Ferreira, S., Duarte, A., Mendonça, Phytotherapy Research : PTR, 19(4), 303– D. I., and Domingues, F. C. (2011). 9. doi:10.1002/ptr.1637 Coriandrum Wagner, sativum essential oil, its mode of action chemistry and phytomedicine in the 21st Steviana Vol. 6. 2014. Moura et al. Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis doi:10.1016/j.mib.2004.06.005 challenges. Pure and Applied Chemistry, Wingard, J. R. (1995). Importance of 77(1), 1–6. doi:10.1351/pac200577010001 Candida species other than C. albicans as Wagner, H. (2011). Synergy research: pathogens in oncology patients. Clinical Infectious Diseases: phytopharmaceuticals. Fitoterapia, 82(1), Publication of the Infectious Diseases 34–7. doi:10.1016/j.fitote.2010.11.016 Society of America, 20(1), 115–125. Wagner, H., and Ulrich-Merzenich, G. (2009). Synergy research: Approaching a new generation of phytopharmaceuticals. Phytomedicine, 97–110. Yang, Y.-C., Lee, S.-H., Lee, W.-J., Choi, D.- H., and Ahn, Y.-J. (2003). Ovicidal and White, R. L., Burgess, D. S., Manduru, M., and Bosso, J. a. (1996). Comparison of caryophyllata bud and leaf oil compounds three different in vitro methods of Agricultural and Food Chemistry, 51(17), checkerboard, and E test. Antimicrobial 4884–4888. doi:10.1021/jf034225f Agents and Chemotherapy, 40(8), 1914–8. Yanishlieva, N. V., Marinova, E., and Retrieved Pokorný, J. (2006). Natural antioxidants from herbs and spices. European Journal of Lipid Science and Technology, 108(9), &rendertype=abstract 776–793. doi:10.1002/ejlt.200600127 Whiteway, M., and Oberholzer, U. (2004). Zaugg, C., and Zepelin, M. B. (2001). Secreted Aspartic Proteinase Family of pathogen interactions. Current Opinion in Candida tropicalis. Infection and …, Microbiology, 7(4), 350–7. 69(1), 405–412. doi:10.1128/IAI.69.1.405 Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del
Campus Universitario-UNA
Gilberto Antonio Benítez Rodas1, Héctor David Nakayama2, Juliana Moura Arrúa3, Griselda Franco Car-dozo4, Rocío Rosmary Acosta Brítez5, Liza María Ramírez Garay6 1Microbiólogo y Docente Investigador del Centro Multidisciplinario de Investigaciones Tecnológicas dependiente de la Dirección General de Investigación Científica y Tecnológica (DGICT-UNA). 2Bioquímico y Docente Investigador Exclusivo de la Universidad Nacional de Asunción. 3Bioquímica y Docente Investigador del Centro Multidisciplinario de Investigaciones Tecnológicas. 4Bióloga y Docente Técnico del Centro Multidisciplinario de Investigaciones Tecnológicas 5Bióloga y estudiante de la maestría en Biotecnología del CEMIT-DGICT-UNA 6Bioquímica y estudiante de la maestría en Biotecnología del CEMIT-DGICT-UNA E mail del autor: Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario-UNA. El
Paraguay se caracteriza por presentar una gran cantidad de recursos hídricos. Muchos de ellos atraviesan
zonas urbanas densamente pobladas, por lo cual quedan expuestos a contaminación proveniente de
diferentes actividades de origen antropogénico. Uno de los principales problemas relacionados con estos
recursos hídricos es la falta de información o trabajos de investigaciones que hayan sido publicados acer-
ca de las poblaciones de microorganismos presentes en dichos ecosistemas. Entre estos recursos hídri-
cos expuestos se encuentra el arroyo San Lorenzo; agua por lo tanto, esta investigación tuvo como objeti-
vo caracterizar al arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario de la Universidad Nacional de
Asunción desde el punto de vista biológico (fitoplancton, zooplancton, hongos y parásitos). Al finalizar la
investigación se identificaron 38 géneros de algas, 2 sub-grupos de zooplancton, 16 géneros de hongos, 2
géneros de parásitos. La mayoría de los géneros son bioindicadores de mala calidad del agua.
Palabras clave: Cianobacterias, Hongos, Parásitos, Arroyo San Lorenzo, Campus Universitario
Biological Characterization of San Lorenzo Creek in a Section located near the Campus of the Na-
tional University of Asuncion.
Paraguay is characterized by possessing a large amount of water re-
sources, many of which pass through densely populated urban areas, which exposes them to pollution
from different anthropogenic activities. One of the main problems related to these water resources is the
lack of information or research papers that have not been published about the populations of microorgan-
isms in these ecosystems. The San Lorenzo Creek is counted among these exposed water resources,
hence this research aimed to characterize the of San Lorenzo Creek in a section of the campus of the
National University of Asuncion from a biological viewpoint (phytoplankton, zooplankton, fungi and para-
sites). Upon completion of the research we identified 38 genera of algae, 2 sub-groups of zooplankton, 16
genera of fungi, and 2 genera of parasites. Most genera are bioindicators of poor water quality.
Keywords:
Cyanobacteria, fungi, parasites, San Lorenzo Creek, University Campus.

INTRODUCCIÓN

que cumplen funciones muy importantes de- ntro del sistema acuático y que además hayan En la actualidad en Paraguay, que es un sido publicados en revistas a nivel nacional e país que se caracteriza por presentar una gran cantidad de recursos hídricos existen muy El conocimiento de la biodiversidad en los pocos trabajos de investigaciones relacionados ambientes acuáticos, así como el estudio de con la biodiversidad biológica en cuanto a las condiciones fisicoquímicas del agua es fitoplancton, zooplancton, hongos y parásitos muy relevante y necesario Steviana, Vol. 6, 2104, pp. 36 - 49 Recibido 9 julio 2014; aceptado 8 setiembre 2014 Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario-UNA 2003; , porque sirven de base comercial más importante en la temporada de (datos e informaciones) como antecedentes verano del Departamento Central del Para- para posteriores trabajos de investigaciones o monitoreos de la calidad de agua de un deter- Debido a que este arroyo es utilizado prin- minado sistema acuático, sobre todo en los cipalmente para la eliminación de los dese- cursos de aguas que sufren un gran estrés chos domésticos e industriales, existen una como el arroyo San Lorenzo por el creciente gran cantidad de trabajos de investigación de impacto o contaminación de origen antro- los parámetros fisicoquímicos y bacteriológi- cos, para el control de la calidad del agua del Teniendo estos antecedentes es muy im- mismo pero que muchos de los cuales no fue- portante empezar a realizar estudios con el ron publicados en revistas científicas. objetivo de crear una base de datos de los Sin embargo, desde el punto de vista del fi- géneros y especies de algas, zooplancton, toplancton, zooplancton, fúngico y a nivel de hongos y parásitos presentes en los diversos parásitos no existen suficientes informaciones ríos, lagos, arroyos y esteros que se encuen- acerca de la población existente en éste siste- tran ubicados sobre todo en la región oriental ma acuático. Por lo tanto, el objetivo general del Paraguay, donde se encuentra la mayor de este trabajo de investigación fue caracteri- densidad poblacional del país de manera a zar dicha población en un tramo, de tal mane- tener datos para poder comparar en el futuro ra a crear un banco de datos inicial accesible con otros trabajos. para futuros trabajos tendientes a completar La ciudad de San Lorenzo se encuentra si- todo el arroyo y poder comparar con otros tuada en el Departamento Central del Para- variados cursos hídricos existentes en nuestro guay y está a 9 kilómetros de la Capital. For- ma parte del conglomerado urbano llamado Área Metropolitana de Asunción o Gran MATERIALES Y MÉTODOS
Asunción y limita al norte con Luque, al sur con Ñemby, al este con Capiatá y al oeste con Puntos de Muestreos Fernando de la Mora. Esta ciudad también es conocida como la Se seleccionaron cuatro puntos de mues- "Ciudad Universitaria" debido a que se en- treos teniendo en cuenta la accesibilidad al cuentra dentro de sus límites, la sede central y arroyo. Se denominó P1 al punto de muestreo el campus de la Universidad Nacional de ubicado en el puente de la avda. Mcal. López, Asunción (UNA). P2 a la entrada de la Ciclo Vía ubicada sobre En esta ciudad comercial e industrial tam- la avenida España, P3 a la entrada ubicada bién se encuentra un arroyo que lleva el mis- sobre la calle Sargento Silva y P4 al ubicado mo nombre "San Lorenzo" que tiene su na- sobre el puente de la avda. Eusebio Ayala ciente en el Barrio Barcequillo y que desem- (Figura 1). Todos los puntos fueron georefe- boca en el arroyo Yukyry y que a su vez, este renciados (Cuadro 1). constituye uno de los principales afluentes del Lago Ypacaraí que es el centro turístico y


Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario-UNA Figura 1. Mapa con los diferentes puntos de muestreos ( )en el Arroyo San Lorenzo (Gentileza Lic. Claudia Ávalos) Cuadro 1. Coordenadas UTM de los puntos de muestreo estudiados durante las cuatro campañas de muestreo. P1: Puente Avda. Mcal. López; P2: Puente Ciclovía- Avda. España; P3: Puente Ciclovía- c/ Sargento Silva; P4: Puente Avda. Eusebio Ayala ELEVACIÓN
COORDENADAS
21J0447943 UTM 7197189 21J0448171 UTM 7197313 21J0448440 UTM 7197433 21J0448690 UTM 7197491 Campaña de muestreos forma cualitativa a la biodiversidad presente Se realizaron cuatro campañas de muestre- Las muestras fueron colectadas de los cua- os, la primera el 22 de noviembre del 2012, la tro puntos del arroyo San Lorenzo por dupli- segunda el 16 de enero de 2013, la tercera el cado, para luego realizar un pool en el labora- 28 de mayo y la cuarta el 06 de noviembre del torio, de manera a analizar e identificar la mismo año. La primera y la segunda corres- mayor cantidad posible de especies. pondieron a inicio y final del verano, la se- gunda a finales de otoño e inicio de invierno, Parámetros Analizados y la cuarta a finales de la primavera. Por lo tanto, se realizaron los muestreos en diferen- Fitoplancton tes estaciones del año de manera a poder ob- Una vez recepcionadas las muestras (fil- servar si las diferentes estaciones afectan en tradas con una red de 45 m x 20 litros) en el Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario-UNA laboratorio, se mezclaron vigorosamente cada Se tomaron muestras de sedimento del frasco de 250 mL para luego depositar 25 mL arroyo mediante una pala tipo Petersen y se en los tubos de Utermöhl y se deja sedimentar colocaron dentro de una bolsa de plástico con por 24 h. para su posterior observación bajo microscopio invertido Motic AE 31 con un . Como pre-tratamiento, cada muestra aumento de 400x. Para la identificación de los fue filtrada previamente mediante el uso de géneros y especies se utilizaron diferentes gazas, el filtrado fue colocado en tubos de claves taxonómicas centrifuga de 15 mL. A continuación se pro- cedió al lavado con agua destilada, mediante centrífuga DSC 16 RV marca Presvac, a velo- cidad de 1500 rpm durante 5 minutos. Se rea- lizó esta acción hasta obtención de sobrena- dante de aspecto claro. El sedimento recupe- Zooplancton rado fue separado en dos fracciones y mante- nido en refrigeración. Las muestras de 100 ml (filtradas con una Se aplicaron dos métodos de análisis cuali- red de 45 m x 20 litros) se mezclaron en tativos para la búsqueda de parásitos: forma vigorosa y una sub-muestra de 10 ml fue tomada con una jeringa de gran calibre y Técnica de Concentración por centrifuga- puesta en una placa cuadrada de Petri cuadri- ción y Flotación con Sulfato de Zinc al culada. Con el uso de un microscopio inverti- do Nikon 205914 con un aumento de 100x, se identificaron hasta especie siempre que fuera La técnica descrita es una adaptación del método propuesto por Standard Methods APHA (1998) para la determinación de pará- sitos en aguas. Este método es efectivo para la concentración de quistes de protozoarios y Se utilizó el método de dilución en placas huevos de helmintos y algunos céstodes. descrito en Standard Methods APHA (1998). De la muestra de 100 mL se mezcló en forma Técnica de Sedimentación por centrifuga- vigorosa y se realizaron diluciones seriadas de ción con Formol-Éter 10-1 y 10-2 en sub-muestras de 10 mL. Poste- riormente se sembró 100 L de cada dilución La técnica descrita es una adaptación de la en placas de Petri de 90 mm con medio agar técnica utilizada para análisis clínicos. Este papa dextrosa suplementado con antibiótico, método es efectivo para concentrar quistes de se incubó a temperatura ambiente y 5 a 7 días protozoarios, huevos y larvas de helmintos, después se evaluaron las características de las recomendados para detectar huevos de trema- colonias fúngicas. Fueron preparadas láminas todos, acantocéfalos y algunos huevos de céstodes que no son aislados por el método de pio binocular CXL 9135002 y en algunos centrifugación con sulfato de zinc. casos fueron purificadas las colonias fúngicas Se realizaron muestras por cuadruplicado y entonces observada bajo microscopio. para cada método de análisis y fueron obser- Parásitos vados por microscopia con aumento de 10X y Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario-UNA 40X con solución fisiológica y con solución En el tercer muestreo al igual que el ante- rior se registró una mayor abundancia de las Chlorophytas con un 35,3%, seguido por las Análisis de Datos Bacillariophytas con un 23,5%, con un leve aumento de las Cianobacterias con un 17,6% Para el procesamiento de los datos obteni- y un aumento importante de las Euglenophy- dos de los diferentes grupos de microorganis- tas con un 17,6%. Durante este muestreo se mos analizados en éste trabajo de investiga- registró la presencia de la división Cryptophy- ción se utilizaron los programas Microsoft Excel 2010 y Sigma Plot 11.0. Al igual que en el segundo y tercer mues- treo, en el cuarto se caracterizó de nuevo por RESULTADOS Y DISCUSIÓN
una mayor biodiversidad de las Chlorophytas con un 30,4%, seguidas de las Bacillariophy- Fitoplancton tas con un 30,4%, Euglenophytas y Cianobac- terias con un 17,4% cada una, y en el caso de Durante los cuatro muestreos se identifica- las Cryptophytas con un 4,3%. ron 14 géneros de Bacillariophytas, 13 géne- A pesar de que el arroyo San Lorenzo se ros de Chlorophytas, 6 géneros de Cianobac- encuentra expuesto a una gran cantidad de terias, 4 géneros de Euglenophytas y 1 género contaminantes tanto de origen industrial como de Cryptophytas (Cuadros 2-6). doméstico, principalmente de las redes cloaca- En las cuatro campañas de muestreo se re- les, se ha registrado una abundante biodiver- gistraron las mismas divisiones de algas, sin sidad de géneros de algas. Sin embargo al embargo al hacer un análisis de presencia o hacer un análisis individual de los géneros lo ausencia de géneros (frecuencia) en los dife- preocupante radica en la biodiversidad de rentes muestreos, sí pudo observarse una va- Cianobacterias presentes en el arroyo, en el riación importante en especial en el caso de cual se han identificado especies como Ap- las Chlorophytas y Bacillariophytas, no así en hanocapsa delicatissima, Cylindrospermopsis el caso de las Cianobacterias, Euglenophytas raciborskii, Microcystis aeruginosa, Micro- y Cryptophytas (Figura 2). cystis flo-aquae, y géneros como Aphanocap- En cuanto a la contribución relativa de las sa sp, Chroococcus sp, Oscillatoria sp y diferentes taxas durante el primer muestreo la Pseudanabaena sp. Esto es debido a que el división con mayor abundancia de géneros y arroyo San Lorenzo es uno de los principales especies fue la Bacillariophyta con un 58,8%, afluentes del Arroyo Yukyry que finalmente seguida de las Cianobacterias con un 29,4%, desemboca en el Lago Ypacaraí y que por lo luego en igual porcentajes las Euglenophytas tanto podría contribuir a empeorar la situa- y Chlorophytas con un 5,9% y por último ción del Lago que afínales del año anterior ausencia de las Cryptophytas. presentó una importante floración por diversas Sin embargo en el segundo muestreo la di- especies de Cianobacterias y muchas de las visión con mayor abundancia de géneros y cuales coincide con las identificadas en el especies estuvo dada por las Chlorophytas con arroyo y que además estaría aportando nu- un 51,9%, seguida por las Bacillariophytas trientes como el Nitrógeno (N) y fósforo (P), con un 29,6%, luego las Cianobacterias con y que podría contribuir con las floraciones de un 11,1%, a continuación las Euglenophytas las algas verde-azuladas con un 7,4% y ausencia de las Cryptophytas. Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario-UNA Zooplancton También la presencia de Euglenophytas es Desde la primera hasta la tercera campaña un bioindicador de que el arroyo presenta de muestreo no se registraron géneros perte- abundante concentración de materia orgánica necientes al grupo de zooplancton, mientras y que al descomponerse se con- que en la cuarta campaña se registraron dos vierte en una importante fuente de nutrientes grupos, uno de los Cladóceros (Daphnia sp.) y principalmente de N y P para las Cianobacte- el otro de los Copépodos (Figura 3). En el caso de este último se pudieron identificar dos como ya se ha mencionado en el párra- sub-grupos, uno perteneciente al estadio de- nominado Nauplius, y un adulto del sub-grupo icepsE 20
gén ed . 10
BACILLARIOPHYTAS Figura 2. Comparación de la biodiversidad de algas fitoplanctónicas durante las cuatro campañas Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario-UNA TOTAL CLADÓCERA Figura 3. Comparación de la biodiversidad de zooplancton durante las cuatro campañas La prácticamente nula presencia de zoo- Se registraron un total de 16 géneros de plancton no es rara de esperar en un ecosiste- hongos durante los cuatro muestreos, ob- ma que presenta una elevada concentración de servándose una mayor biodiversidad de los contaminantes de diversos orígenes que afecta mismos durante el primer muestreo, y perma- directamente a dicha población neciendo casi constante en relación a los . Sin embargo, es evidente que géneros fúngicos identificados desde el se- a pesar de la ausencia de microorganismos gundo al cuarto muestreo (Cuadro 7). consumidores primarios desde el primero al La gran mayoría de los hongos identifica- tercer muestreo, en el último se pudo identifi- dos a nivel morfológico corresponde al grupo car la presencia de Cladóceros, que es un gru- de los hifomicetes, de acuerdo con la clave de po muy importante como bioindicador de y son hialinos. aguas con posibilidad de recuperación o ten- Los hifomicetes en general son hongos de dientes a un equilibrio ambientes terrestres que posee adaptaciones . Esta presencia pudo deberse a las últi- para el medio acuático, siendo sus esporas y/o mas lluvias registradas previas al cuarto mues- hifas introducidos en el ambiente acuático por treo que favoreció la aparición éste grupo del el flujo de las aguas, lluvias y viento zooplancton por la posible dilución de los Esto justifica la presencia constante de los géneros fúngicos filamentosos tales como Aspergillus sp., Penicillium sp., Cladosporium sp. y Paecilomyces sp., (Figura 4).


Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario-UNA inhibiendo o retardando el crecimiento fúngi-co, (3) y por último, la contaminación del arroyo San Lorenzo que está modificando la capacidad de crecimiento de la población fúngica normal .
Parásitos

Con la técnica de flotación con Sulfato de
Zinc al 33% en el primero y segundo mues-treo no se registraron parásitos ni huevos; mientras que con la técnica de Sedimentación por centrifugación con Formol-Éter en el P4 Figura 4. Características microscópicas (400x) de se identificaron huevos y larvas de Uncinaria Aspergillus spp. (a), Cladosporium spp. (b), sp. . Penicillium spp. (c) y Paecilomyces spp. (d) (Foto: En el tercer muestreo con la técnica de Se- dimentación se identificaron la forma parasi- taria en forma de huevo de Uncinaria sp. en Las levaduras Rhodotorula spp. y Candida todos los puntos de muestreo; mientras que en spp. también estuvieron presentes en todos los P2 se hallaron huevos de Ascaris lumbricoi- puntos y periodos, además se observaron otras des. En los puntos P1, P3 y P4 se registraron especies de levaduras que no se pudieron Uncinaria identificar. Candida spp. es una levadura cuyo hábitat normal es el intestino humano y el de En el cuarto muestro de nuevo con la otros animales de sangre caliente, lo que pue- técnica de Sedimentación se identificaron en de reflejar niveles de contaminación fecal, todos los puntos de muestreos al igual que en sirviendo así como bioindicadores de polución el tercer muestreo la presencia de huevos de Uncinaria sp.; mientras que solo en P2 se Algunos hongos como Aspergillus spp., hallaron huevos de Ascaris lumbricoides Candida spp., Sporothrix schenckii pueden ser agentes causales de enfermedades en A través de estas técnicas pudieron identi- humanos, en especial en pacientes inmuno- ficarse dos géneros de parásitos, Ascaris lum- comprometidos, por lo que el agua no podría bricoides y Uncinaria sp., bajo las formas de considerarse para uso primario ni secundario huevos y larvas, que coinciden con las formas infectantes (Figura 5). Debido a que el curso de agua del Arroyo San Lorenzo desemboca finalmente en el Lago Se esperaba aislar una mayor diversidad de Ypacaraí, se recomienda hacer un seguimiento hongos y esto puede ser atribuido a tres razo- a lo largo del arroyo hasta la desembocadura nes: (1) la técnica no es tan sensible, siendo necesario la búsqueda de otras técnicas para identificación de hongos en agua, (2) a la pre- sencia masiva de bacterias que pueden estar métodos de concentración por sedimentación


Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario-UNA y flotación son considerados los más adecua- La mayoría de los géneros corresponden a dos para la búsqueda de formas parasitarias microorganismos bioindicadores de la mala calidad del agua. Se ha generado una base de datos inicial de la biodiversidad de géneros y especies presen- tes en el arroyo San Lorenzo durante el perío- Se han identificado 38 géneros de algas, do de un año a partir de noviembre del 2012. Bacillariophytas (14), Chlorophytas (13), Cianobacterias (6), Euglenophytas (4) y Cryp- tohpytas (1); 2 sub-grupos de zooplancton, 16 géneros de hongos, 2 géneros de parásitos (Uncinaria sp. y Ascaris lumbricoides). Figura 5. Características microscópicas de Parásitos (400x) identificadas en el tercer muestreo. a) Larva de
Uncinaria sp. b) Huevo de Uncinaria sp. c) Huevo de Ascaris lumbricoides (Foto: Héctor Nakayama)

Cuadro 2. Biodiversidad de Cianobacterias en los diferentes puntos de muestreos durante las cuatro
campañas. 1: presencia; 0: ausencia
22/11/2012
16/01/2013
28/05/2013
06/11/2013
Aphanocapsa delicatissima Aphanocapsa sp. Chroococcus sp. Cylindrospermopsis raciborskii Microcystis aeruginosa Microcystis flos-aquae Oscillatoria sp. Pseudanabaena sp. Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario-UNA Cuadro 3. Biodiversidad de Chlorophytas en los diferentes puntos de muestreos durante las cuatro campañas. 1: presencia; 0: ausencia 22/11/2012
16/01/2013
28/05/2013
06/11/2013
Actinastrum sp. Chloratella sp. Closterium moniliferum Closterium sp. Coelastrum reticulatum Cosmarium sp. Crucigenia rectangularis Elakatothrix sp. Micrasteria sp. Monoraphidium contortum Monoraphidium sp . Pediastrum sp. Scendesmus obliquus Scendesmus quadricauda Scenedesmus sp. Staurastrum sp. Staurastrum tetracerum Tetraedon sp.
Cuadro 4. Biodiversidad de Euglenophytas en los diferentes puntos de muestreos durante las cuatro
campañas. 1: presencia; 0: ausencia
22/11/2012
16/01/2013
28/05/2013
06/11/2013
Euglena sp. Phacus oscillans Phacus sp. Strombomonas sp. Trachelomonas sp. Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario-UNA Cuadro 5. Biodiversidad de Bacillariophytas en los diferentes puntos de muestreos durante las cuatro campañas. 1: presencia; 0: ausencia 22/11/2012
16/01/2013
28/05/2013
06/11/2013
Amphipleura pellucida Aulacoseira granulata Cyclotella sp. Cymatopleura sp. Cymbella sp. Fragilaria capucina Gomphonema sp. Gyrosigma attenuatum Navicula sp. Pinnularia appendiculata Pinnularia gibba Pinnularia sp. Stauroneis anceps Stauroneis sp. Surirella angustata Surirella sp. Synedra ulna Tabellaria sp.
Cuadro 6. Biodiversidad de Cryptophytas en los diferentes puntos de muestreos durante las cuatro
campañas. 1: presencia; 0: ausencia
22/11/2012
16/01/2013
28/05/2013
06/11/2013
Cryptomonas sp. Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario-UNA Cuadro 7. Biodiversidad de especies de hongos encontrados en los diferentes puntos de muestreos durante las cuatro campañas. 1: presencia; 0: ausencia 22/11/2012
16/01/2013
28/05/2013
06/11/2013
Aureobasidium spp. Aspergillus spp. Acremonium spp. Aspergillus flavus Aspegillus niger Cladosporium spp. Penicillium spp. Paecylomyces spp. Curvularia spp. Geotrichium spp. Rhizoctonia spp. Trichoderma spp. Sporothrix schenckii Trichotecium spp. Rhodotorula spp. Candida spp.
AGRADECIMIENTOS

Pollution Federation Al Prof. Ing. Forestal César Cardozo, di- Normalizados para el análisis de aguas rector general de la DGICT por todo el apoyo potables y residuales. 20 ed. Madrid - brindado para realizar este trabajo de investi- España: Díaz de Santos S. A. gación con fondos del Rectorado de la Uni- Beaver, P. 1964. "Lucha contra los helmintos versidad Nacional de Asunción. transmitidos por el suelo." Organización Mundial de la Salud. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Begun, A. A. 2006. "The summer-autumn phytoplankton in the Golden Horn Bay Alonso, C., L. De la Fuente, D. Del Pozo, L. (the Sea of Japan) under conditions of Bueno, A. Garcia, M. Ramos, M. anthropogenic pollution." International Althofer, and J. García. 2008. "Problemas Journal on Algae no. 8 (3):255-273. de las cianobacterias en aguas de recreo y Bourrelly, P. 1966. Les Algues D'eau Douce. aguas de consumo." Centro de Estudios Vol. 1-3. Paris-Francia: Éditions N. Hidrográficos del CEDEX. España:63-69. Alvarez, C. I. V. 1993. "Caracterización Campos-Pinilla, C., M. Cárdenas-Guzmán, micológica de aguas "crudas" y filtradas en and A. Adriana Guerrero-Cañizares. 2008. la Planta de Tratamiento de Tres Ríos, "Comportamiento de los indicadores de Costa Rica." Revista de Biologia Tropical contaminación fecal en diferente tipo de no. 41 (3):417-422. aguas de la sabana de Bogotá (Colombia)." APHA, AWWA, and WPCF. 1998. American Universitas Scientiarum no. 13 (2):103- Association Association Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario-UNA Canese, A., R. Dominguez, C. Otto, C. The General of th Organization of Ocampos, and E. Mendonca. 2003. American States. "Huevos infectivos de Toxocara en arenas "Floraciones de plazas y parques de Asunción, Paraguay." Arch Pediatr Urug no. 74 características, recomendaciones." Insituto de Biología, Ceballos, B.S.O., E.O. Lima, A. Konig, and Facultad de Ciencias. Uruguay. M.T. Martins. 1995. "Spatial and temporal Echenique, V., C. Rubinstein, and L. distribution of fecal coliforms, coliphages, Mroginski. 2004. " Biotecnología y moulds and yeast in freshwater at the semi- mejoramiento vegetal II." arido tropic Northeast region in Brazil El Moor-Loureiro, L. 1997. Manual de (Paraíba State)." Revista de Microbiologia Identificaçâo de Cladóceros Límnicos do no. 26 (2):90-100. Brasil. Brasilia-Brasil: Editora Universa - Conti, A, M. Rodríguez, and C. Angelaccio. 2005. "Ocurrencia de Cyanobacterias y sus Fabre, A., C. Carballo, E. Hernández, P. Piriz, Toxinas (Microcistinas) en Aguas del Río L. Bergamino, L. Mello, S. González, G. de la Plata: Evaluación Rápida usando el Pérez, J. León, L. Aubriot, S. Bonilla, and ensayo ELISA." XX Congreso Nacional C. Kruk. 2010. "El nitrógeno y la relación del Agua y III Simposio de Recursos zona eufótica/zona de mezcla explican la Hídricos del Cono Sur. 9 al 14 de Mayo presencia de cianobacterias en pequeños 2005. Mendoza, Argentina. Córdoba, A., M. L. Ciarmela, B. Pezzani, M. Uruguay." Panamjas no. 5 (1):112-125. I. Gamboa, M. Marta de Luca, M. Gaete, H., and K. Paredes. 1996. "Toxicidad Minvielle, and J. A. Basualdo. 2002. de mezclas de contaminantes químicos "Presencia de parásitos intestinales en sobre el cladócero Daphnia magna." Rev. paseos públicos urbanos en La Plata Int. Contam. Ambient. no. 12 (1):23-28. Argentina." Parasitol Latinoam no. 57:25- Gagneten, A. M., and N Ceresoli. 2004. "Efectos del efluente de curtiembre sobre Costamagna, S. , E. Visciarelli, L. D. Lucchi, la abundancia y riqueza de especies del and J. A. Basualdo. 2005. "Parásitos en zooplancton en el arroyo las prusianas aguas del arroyo Naposta, aguas de (Santa Fe, Argentina)." Interciencia no. recreación y de consumo en la ciudad de Bahia Blanca (Provincia de Buenos Aires, Giménez, P., and W. Woroniecki. Argentina)." Parasitol "Dispositivo Retentor de Residuos Sólidos para El Arroyo San Lorenzo." UNA. Da Silva, S. 2000. Inventário Taxonômico das Henry, R. 1990. "Amônia ou fosfato como Desmídias (Zygnemaphyceae) dos Rios na agente estimulador do crescimiento do Abrangência fitoplâncton na represa de Jurumirim (Rio Hidreléctrica de Salto Caxias, Botânica do Paranapanema, SP)." Rev. Brasil. Biol. no. Setor de Ciências Biológicas, Universidad Federal do Paraná, Curitiba-Brasil. Hoog, G.S., and J. Guarro. 1995. Atlas of De Infante, A. G. 1988. El Plancton de las Clinical Fungi. España: Centraalbureau Aguas Continentales. Caracas-Venezuela: Schimmelcultures, Universitat Rovira i Virgilli. Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario-UNA Komárek, J., and B. Fott. 1983. Das Didáctico Phytoplankton des SüBwassers. Alemania: Identificaçâo do Zooplâncton de Sete Schweizerbart'sche Reservatórios Paranaenses. Verlagsbuchandlung. Brasil: Instituto Ambiental do Paraná. Philipose, M. T. 1967. Chlorococcales. New Delhi-India: Indian Council of Agricultural "Clasificación de la esporotricosis. Una propuesta con base en el comportamiento Pierangeli, N. , A. L. Giayetto, A. M. inmunológico." Dermatología Manacorda, Barbieri L. M., Soriano S.V., Mexicana no. 55:200-208. A. Veronesi, Pezzani B.C., Minvielle M. Sifuentes-Osornio, J., D. E. Corzo-León, and C., and Basualdo J. A. 2003. Estacionalidad de parásitos intestinales en "Epidemiology suelos periurbanos de la ciudad de infections in Latin America." Current Neuquén, Patagonia, Argentina." Tropical fungal infection reports no. 6 (1):23-34. Medicine no. 8 (3):259-263. Silva, S., M. Negri, M. Henriques, R. Pizzolon, L. 1996. "Importancia de las Oliveira, D. W. Williams, and J. Azeredo. cianobacterias como factor de toxicidad en las aguas continentales." Interciencia no. biology, epidemiology, pathogenicity and Romo, S. G. 1989. "Estudio del fitoplancton resistance." de un lago somero y oligotrófico: Loch Microbiology Reviews no. 36:288-305. doi: Rusky (Escocia)." Anales Jard. Bot. Madrid no. 46 (1):127-138. Streble, H., and D Krauter. 1987. Atlas de los Sánchez, María Luisa Peleato. 2011. Las Microorganismos cianobacterias: cooperación Barcelona-España: Ediciones Omega S.A. competencia, Real Academia de Ciencias Vila, I., and R. Pardo. 2003. "Respuesta de la Exactas, Fisicas, Quimicas y Naturales de fitoplanctónica perturbaciones antrópicas de un lago Zaragoza-España. templado." Limnetica no. 22:93-102. Santos, Diaz de. 1992. Métodos Normalizados Wurzbacher, C.M. , F. Bärlocher, and H.P. para el análisis de aguas potables y residuales. Madrid - España: Diaz de ecosystems." Aquatic Microbial Ecology no. 59 (125-149). Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syria-
cum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el
método de destilación por arrastre de vapor
Miguel Martínez1, Claudia Mancuello1, Claudia Pereira1, Fidelina González1, Bonifacia Benítez1, Francisco Ferreira2, César Sena3 1 Laboratorio de Análisis de Recursos Vegetales – Departamento de Biología – Facultad de Ciencias
Exactas y Naturales – Universidad Nacional de Asunción.
2 Laboratorio de Análisis Instrumental – Facultad de Ciencias Exactas y Naturales – Universidad Na-
cional de Asunción.
3Agroindustria Kokué Poty S.A
E mail del autor:
Extracción y caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraí-
do en diferentes tiempos.
Se estudió la composición química del aceite esencial de Origanum syria-
cum
L. —nueva variedad introducida en Paraguay— extraído a las 2, 4 y 6 horas del proceso respecti-
vamente, por el método de destilación por arrastre de vapor de agua, a partir de hojas previamente
desecadas. Se llevaron a cabo la identificación botánica y el análisis morfoanatómico de la especie
vegetal en estudio con el propósito de comprobar su autenticidad, paso fundamental para el inicio de
la investigación. La caracterización química del aceite esencial se realizó por cromatografía gaseosa
acoplada a espectrometría de masas (GC-MS); la cual reveló que el aceite está constituido mayorita-
riamente por carvacrol en porcentajes de 19,2; 11,9 y 19,5% correspondientes a las 2, 4 y 6 horas de
extracción, además de la variedad de otros compuestos en menor proporción, apareciendo algunos
particulares en los diferentes periodos de extracción. Se determinaron además la densidad, el índice
de refracción, el pH, la solubilidad y el espectro UV como parámetros adicionales de caracterización.
El rendimiento del aceite esencial fue del 1,71% al final del proceso de extracción, expresado en base
seca.
Palabras Claves: Origanum syriacum, Aceite esencial, Carvacrol, destilación por arrastre de vapor de
agua

Extraction and physicochemical characterization of Origanum syriacum
L. essential oil extract-
ed at different times through steam distillation.
This research studied the chemical composition of
the essential oil of Origanum syriacum L. —a new variety introduced in Paraguay— extracted at 2, 4
and 6 hours of processing respectively, by the method of steam distillation from dried leaves. Botanical
identification and morpho-anatomical analysis of the plant species under study were conducted in order
to check its authenticity, an essential step in the initiation of the investigation. Gas chromatography
mass spectrometry (GC-MS) revealed that the essential oil is mainly constituted by carvacrol in per-
centages of 19.2, 11.9 and 19.5% corresponding to the 2, 4 and 6 hours of extraction respectively; as
well as a variety of other compounds in lower amounts, a few particular ones appearing in the different
extraction periods. The density, refractive index, pH, solubility, and UV spectra were also determined
as additional characterization parameters. The essential oil yield was 1.71% on a dry base.

Keywords:
Origanum syriacum, esential oil, carvacrol, steam destilation
Los principales tipos de orégano de im- portancia económica en el mundo son: el Steviana, Vol. 6, 2104, pp. 50 - 69 Recibido 6 julio 2014; aceptado 10 noviembre 2014


Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor orégano turco (Origanum onites L.); griego go; a nivel externo actúa como analgésico, (Origanum vulgare ssp.); español (Cori- cicatrizante y antiséptico (USAID 2008). dohymus capitatus L.) y el orégano mexica- Uno de los usos más comunes del oréga- no (Lippia berlandieri Shauer) (Aranda no (Origanum vulgare) es como condimento 2009). El orégano es una hierba introducida en el preparado de platos típicos de cada en Paraguay. Fue encontrada en forma sil- país, sin embargo, en los últimos años se han vestre en el desierto de Sinai y Egipto dado nuevas aplicaciones en diferentes (Chishti, Kaloo and Sultan, 2013). El Ori- ámbitos, como antimicrobiano y antioxidan- ganum syriacum L. es una variedad introdu- te en los alimentos (Zheng 2001). Esto se cida en Paraguay desde la ciudad de Tarija debe a que de sus hojas se extrae aceite de la Replública Pluricultural de Bolivia. La esencial, cuyos componentes químicos prin- Agroindustria Kokué Poty S.A. es la segun- cipales son carvacrol y timol (Figura 2), que da en cultivarla en nuestro país y la que po- confieren al orégano sus características anti- see mayor extensión de cultivo abarcando sépticas, tónicas, diuréticas, entre otras (Al- actualmente casi 4 hectáreas (Figura 1). Figura 2: Estructura química del timol y del carvacrol (IK=1296) En la actualidad, el aceite esencial de orégano (Origanum syriacum L.) es produ-cido en Paraguay por la Agroindustria Ko- kué Poty S.A, siendo la mencionada empre- Figura 1: Cultivo de Origanum syriacum L. en Colonia Independencia Departamento de Guairá- sa la primera en producirla dentro del territo- rio nacional. La Agroindustria Kokué Poty S.A ha realizado una alianza estratégica con El orégano como el Origanum vulgare la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales fue utilizado desde tiempos arcaicos por sus de la Universidad Nacional de Asunción propiedades tónicas y amargas (USAID para realizar todos los ensayos correspon- 2008; Fundación Integra 2014). En la "Fito- dientes al control de calidad y toxicidad de terapia" Vademécum de prescripción (1992), aceites esenciales extraídos de especies ve-se indica su acción farmacológica a nivel getales aromáticas, principalmente orégano interno como tónico general, digestivo, es- de la especie Origanum syriacum L., ya que pasmolítico, carminativo, expectorante, anti- hay buenas perspectivas de exportarlo al séptico de las vías respiratorias y emenago- mercado de la República de China como materia prima para preparados farmacéuti- Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor cos (cápsulas blandas).Ya que el aceite Colonia Independencia del Departamento esencial posee actividad antifúngica, anti- del Guairá a 200 km. de la capital de Re- bacteriana, es buen antihistamínico y muy pública del Paraguay. eficaz contra problemas digestivos y respira- torios, apuntando además a otros mercados MATERIALES Y MÉTODOS
internacionales, ya que éstos lo cotizan en altos precios (Unión Europea-Perú 2004). Este trabajo fue realizado en el Laborato- La Agroindustria Kokué Poty, por medio rio de Análisis de Recursos Vegetales área del cultivo de Origanum syriacum L. genera Química Orgánica de los Productos Natura- fuente de trabajo para cierto número de habi- les del Departamento de Biología de la Fa- tantes (250 personas equivalente a 50 fami- cultad de Ciencias Exactas y Naturales de la lias aproximadamente.) de Colonia Indepen- Universidad Nacional de Asunción. dencia del Departamento del Guairá y co- mercializa el producto final en el mercado Material de estudio local, compitiendo fuertemente con otros productores que producen otra variedade de orégano como el Origanum vulgare (USAID Espectrofotómetro El orégano es una especia con importante SHIMADZU serie 160 A. Cromatógrafo demanda a nivel mundial y del MERCO- gaseoso acoplado a espectrometría de masas SUR a nivel regional (USAID 2008). Los de la marca SHIMADZU modelo 2010. volúmenes producidos en los países produc- Microscopio óptico marca OLYMPUS serie tores, no llegan a cubrir la demanda de im- BH2. Cámara digital MOTICAM 352. Re- portadores mayoristas, industria agroalimen- fractómetro BAUSCH y LOMB, pHmetro taria y consumidor detallista (USAID 2008). METROHM serie 69, Equipo de destilación En tal sentido, existe una oportunidad de por arrastre de vapor marca CHIYUNG mo- mercado para un producto no tradicional. delo ST2-2X3 Los precios de los alimentos están en cons- tante crecimiento y el del orégano en espe- Reactivos químicos cial va completando una curva de crecimien- to sostenida, lo que redondea la oportunidad Acetona grado Cromatografía Gaseosa de mercado existente (USAID 2008). (GC) y hexano grado pro-análisis, ambos de En Paraguay no se han reportado datos la línea Merck. recientes de la producción por hectárea del orégano para demostrar la sustentabilidad de Colecta del espécimen vegetal en estudio este recurso, ni mucho menos la capacidad La especie vegetal estudiada fue colecta- productora de aceites esenciales, lo que le da en la compañía Mayor Cue del Distrito daría un potencial valor agregado. Por todo Colonia Independencia del Departamento lo mencionado con anterioridad se planteó el del Guairá con coordenadas geográficas presente trabajo con el objetivo de caracteri- 25°51'0,59"S zar el aceite esencial Origanum vulgare var. 56°9'36,39"O, durante la estación de verano, Maru de la compañía Mayor Cué del distrito en fecha 07 de marzo del año 2014. Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor Preparación de especímenes "voucher" caracterización botánica es el primer paso como material de herbario para la verificación de la autenticidad del espécimen vegetal con el que se trabaja, en El secado, envenenado y montaje del este sentido es muy importante disponer de ejemplar fue realizado según metodología patrones micrográficos como referencia convencional para tratamiento de especíme- (World Health Organization 1998), en todo nes. El espécimen testigo (MM, 8) fue depo- trabajo relacionado a productos naturales de sitado en el Herbario FACEN, de la Facultad origen vegetal. Con referencia a lo mencio- de Ciencias Exactas y Naturales de la Uni- nado por la OMS, es relevante la caracteri- versidad Nacional de Asunción. zación morfológica de la especie Origanum syriacum L., para lo cual se siguió la meto- Identificación taxonómica y descripción dología convencional de caracterización del espécimen vegetal morfológica, con observación directa y al microscopio estereoscópico (Argüeso 1986). La identificación del material vegetal, realizado por un botánico (Bonifacia Benítez Caracterización anatómica foliar y cau- de Bertoni), es un paso indispensable antes del estudio fitoquímico, farmacológico y/o toxicológico, para garantizar la autenticidad El material fue hidratado con agua desti- de la especie utilizada en la investigación lada por 4 horas. Se realizaron cortes trans- (Hostettmann K. et. al. 2008). versales a mano alzada de hojas, se diafani- Para la determinación taxonómica y la zaron con disolución de hipoclorito de sodio resolución de la problemática nomenclatural al 2,5% y posteriormente se aplicó tinción se utilizaron la Base de Datos del Missouri directa con disolución de safranina al 1%. Botanical Garden, Tropicos (2014) y The Las láminas fueron montadas con la técnica Plant List (2013) gelatina-glicerina (Argüesso op. cit.) y depo- El material testigo de la especie vegetal sitadas en el Herbario FACEN (CP, 12). Las en estudio quedó depositado como muestra microfotografías fueron tomadas con cámara (MMNº:08) permanente en el Herbario FA- digital MOTICAM 352 incorporada al mi- CEN del Laboratorio de Análisis de Recur- croscopio óptico y editadas con el software sos Vegetales de la Facultad de Ciencias Motic Images Plus 2.0 (Motic China Group, Exactas y Naturales de la Universidad Na- cional de Asunción. Preparación del material vegetal para la Caracterización morfológica de la espe- extracción del aceite esencial cie vegetal El material vegetal utilizado en este tra- La morfo-anatomía vegetal constituye un bajo fue secado a temperatura ambiente, con campo de estudio de gran importancia para escasa aireación y bajo sombra, para evitar el reconocimiento preciso de las especies la acción del oxígeno, la luz, la temperatura vegetales, desde el punto de vista del proce- y microorganismos; factores que podrían so de desarrollo de tejidos y órganos. La transformar los compuestos originales en Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor artefactos (Hostettmann et al. 2008). Las 8ºC.min-1. y a 160 ºC por 4 min.; Rastreo hojas secas fueron utilizadas en el proceso m/z de 50 a 280 uma; Inyector: 200ºC; De- de extracción del aceite esencial tector: 240ºC; Interface : 220ºC; Volumen de inyección: 1µL; Tiempo muerto: 3 min.; Extracción y características físicas del Modo de inyección: splitless; Columna: aceite esencial SPB-5 y flujo en columna 0,56 mL.min-1. Los compuestos fueron identificados por Hojas del material vegetal previamente comparación de los espectros de masas de desecadas (35 kg), fueron sometidas a desti- cada componente resultante en la GC-MS, lación por arrastre de vapor de agua durante con los estándares de las bases de datos un periodo de seis horas, muestreando el aceite obtenido con frecuencia de dos horas (M1= 2 horas.; M2= 4 horas y M3= 6 (horas). RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El residuo acuoso del aceite se eliminó con sulfato de sodio anhidro (Na2SO4) y el pro- Identificación y descripción taxonómica ducto final se almacenó en recipientes de de del especimen vegetal Origamun syria- color ámbar para protegerlo de la luz, cum L. además, fue refrigerado a 4ºC hasta el mo- mento del ensayo analítico. Herbácea, perenne. Tallo erecto, ramifi- Al aceite esencial se le determinó los si- cado, con densa pubescencia. Hojas simples, guientes parámetros físicos: color, olor, den- opuestas, densamente pubescentes tanto en sidad, índice de refracción, solubilidad en el haz como en el envés, con 4 a 5 nervadu- éter de petróleo, diclorometano, hexano, ras que parten desde la base de la hoja, con acetato de etilo, etanol, metanol, agua y twe- peciolos cortos, de formas elípticas a oblon- en (Murillo, 2004). Adicionalmente se cal- gas, 1,5 x 0,8 cm. Inflorescencia en vertici- culó el rendimiento y el espectro ultravioleta lastro, terminal, con brácteas y bractéolas. (UV), utilizando hexano como disolvente. Flores hermafroditas, cigomorfas. Perianto pentámero, cáliz formado por sépalos solda- Análisis de la composición química del dos, pubescente en el dorso, corola con 5 aceite esencial por cromatografía gaseo- pétalos soldados, bilabiada, blanca y muy sa acoplada a espectrometría de masas aromática. Androceo didínamo, con estam- bres pegados al tubo de la corola. Fruto núcula (Figura 3). El aceite esencial de Origanum syriacum L. (50 µL) se disolvió en 1mL de acetona Caracterización anatómica de Origanum grado GC, de esta solución resultante (ex- cyriacum L. tracto final), se inyectó un volumen de (1 µL) en el cromatógrafo de gases acoplado a Caracterización anatómica foliar Parámetros analíticos del GC-MS: Tempe- La epidermis es uniestratificada, con es- ratura del horno (190ºC), Rampa de tempe- tomas anomociticos en la epidermis abaxial, ratura (80ºC por 2 min.; de 80 a 160ºC a caracterizando a la hoja como hipostomáti-ca. La nervadura central es más prominente


Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor hacia el envés, el haz vascular es colateral Caracterización anatómica caulinar El mesófilo (Figura 4B) es bifacial con El tallo en sección transversal es subcua- simetría dorsiventral, constituido por dos drangular, con ángulos redondeados y lados tipos de parénquima, en empalizada y espon- convexos (Figura 5A). La epidermis es joso. El primero está localizado hacia la cara uniestratificada, con dos tipos de tricomas, adaxial, compuesta de una a dos capas de eglandulares y glandulares. Los tricomas células alargadas. El parénquima esponjoso eglandulares, uniseriados, erectos, largos, se localiza hacia la cara abaxial, compuesta pluricelulares, papilosos (Figura 5D); y tri- por tres a cuatro capas de células con formas comas glandulares con pie corto, uniseriado irregulares y grandes espacios intercelulares. Están presentes en ambas caras de las Por debajo de la epidermis, se encuentra hojas dos tipos de tricomas, eglandulares y la corteza, constituida por bandas continuas glandulares. Los tricomas glandulares son de colénquima, seguido de parénquima. En uniseriados con pie corto y cabeza secretora la parte central del tallo, rodeado por los unicelular oval (Figura 4C). Los tricomas haces vasculares se encuentra la médula eglandulares son uniseriados, erectos, largos, compuesta por células parenquimáticas (Fi- pluricelulares, papilosos (Figura 4D). Estos tipos de pelos fueron observados también en Origanum vulgare L. (Corrêa et. al. 2009) y coinciden con lo mencionado por Metcalfe & Chalk (1988). Figura 3: Planta de Origanum syriacum L. Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor Figura 4: A. Nervadura Central. B. Mesofilo. C. Tricoma glandular. D. Tricoma eglandular de Origanum Syriacum L. Referencias: Ep. epidermis, Hv. haz vascular, P. parenquima, Pem. parenquima en empalizada, Pes. parenquima esponjoso. Figura 5: A, B y C. Vista del tallo en sección transversal. D. Tricoma eglandular. Referencias: Ep. epidermis, Hv. haz vascular, Fi. fibras esclerenquimáticas, P. parénquima. Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor Características físicas del aceite esencial plos: carvacrol (8); 2-Isopropil-1-metoxi-4-
del Origanum syriacum L. metilbenceno (7) y el beta-Cimeno (3), ca-
paces de asociarse a través de puentes de Las propiedades físicas de los aceites hidrógeno, que aumentarían la masa en un esenciales están relacionadas con la diversi- volumen pequeño (Murillo 2004). dad de sus constituyentes, convirtiéndose en Índice de refracción. La gran mayoría de
un instrumento rápido de identificación y las esencias que provienen de especímenes evaluación del grado de pureza o del origen vegetales, poseen valores de índices de re- del producto, puesto que se trata de su huella fracción comprendidos entre 1,40 y 1,61 a digital (Murillo 2004). 20 °C (Calderón 1963). Los valores obteni- Los valores obtenidos experimentalmente dos experimentalmente para la esencia en para los parámetros físicos: Color, olor, estudio se encuentran dentro de los rangos densidad, índice de refracción y pH se resu- normales (Murillo 2004). men en las Tablas 1, 2 y 3 correspondientes pH. Los valores de pH obtenidos infor-
a la esencia extraida a las 2, 4 y 6 horas res- maron que la esencia presenta carácter ácido y dan indicios de la presencia de compuestos Color. Aunque la gran mayoría de los
del tipo fenol (carvacrol (8), lo que concuer-
aceites esenciales de origen vegetal son in- da con lo planteado en la densidad. coloros, algunos presentan coloraciones modificables por el oxígeno del aire y la luz (Murillo E., 2004); lo que se observó en el Tabla 1. Aceite esencial extraido a las 2 horas caso del aceite esencial de Origanum syria- Valoración
cum L., cuyo color amarillo pálido se modi- ficó gradualmente por los mencionados fac- amarillo pálido tores, lo que a su vez insinúa la presencia de compuestos alifáticos cíclicos con pocas insaturaciones como por ejemplo el trans- Índice de refracción hidrato de sabineno (5); cis-hidrato de sabi-
neno (11); Oxido Ledeno-(II) (13) o el (-)-
Terpinen-4-ol (6) o bien compuestos aromá-
ticos monoanulares como el 2-Isopropil-1- Tabla 2. Aceite esencial extraido a las 4 horas metoxi-4-metilbenceno (7) o el carva-
Valoración
crol(IK=1296) (8) (Murillo 2004).
característico, Densidad. Las densidades de los aceites
amarillo pálido esenciales generalmente oscilan entre 0,8 y 1,2 g.mL-1 (Calderón 1963). Los valores experimentales de 0,874; 0,888 y 0,877 Índice de refracción g.mL-1 correspondientes al aceite muestrea- do a las 2, 4 y 6 horas de estracción respec- tivamente, indicarían un elevado contenido de compuestos de baja masa molecular o de constituyentes tipo fenólicos como ejem- Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor Tabla 3. Aceite esencial extraido a las 6 horas Tabla 6. Aceite esencial extraido a las 6 horas Valoración
Solvente
Solubilidad
característico, Éter de petroleo amarillo pálido Acetato de etilo Índice de refracción Solubilidad. Los resultados se expresan Tween
en las Tablas 1, 2 y 3 que corresponden a la Referencias: S: soluble; IS: insoluble.
esencia extraida a las 2, 4 y 6 horas del pro- ceso respectivamente. Como es de esperarse, Rendimiento: A partir de 35 kg de Ori-
el aceite resulta soluble en solventes de natu- ganum syriacum L. seco, se obtuvieron raleza orgánica e insoluble en agua; sin em- volúmenes de 186, 248 y 186 mL de aceite bargo, el agua adquiere el olor y sabor de la esencial correspondientes a las 2 (t1), 4(t2) y esencia al mezclarse con ésta, lo que se ex- 6(t3) horas de extracción (Figura 6). Para t1 plica por la presencia de ciertos compuestos el rendimiento fue del 0,531% (31,1% de dentro de la esencia capaces de formar puen- proceso global), para t2 el 0,708% (41,4% tes de hidrógeno con el agua o bien molécu- del proceso global) y para t3 el 0,474% las lo suficientemente pequeñas para solubi- (27,7% del proceso global). lizarse en el agua. La sumatoria de los mencionados valores Tabla 4. Aceite esencial extraido a las 2 horas de porcentaje generó el 1,71% de rendimien- Solvente
Solubilidad
to correspondiente al proceso global, que Éter de petroleo correspondería a un volumen de 600 mL de acite esencial obtenido al término del proce- so de destilación. Como puede persibirse el Acetato de etilo mayor porcentaje de aceite esencial se obtu- vo a las 4 horas de extracción (Figura 7), lo que significa que al cumplirse ese tiempo, ya se obtuvo el 72,5% de la totalidad de la esencia contenida en 35 kg del espécimen Tabla 5. Aceite esencial extraido a las 4 horas vegetal en estudio. Solvente
Solubilidad
Éter de petroleo Características espectroscópicas UV El espectro UV del aceite esencial extra- Acetato de etilo ido a las 2 horas del proceso de extracción y disuelto en etanol absoluto mostró bandas a 273 nm, (A: 0,465) y 209 nm (A: 1,732), la esencia extraida a las 4 horas presentó ban- das a 274 nm (A: 0,891) y 218 nm (A: Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor 2,343) y la esencia muestreada a las 6 horas bisaboleno (12) y las de 273 y 274 nm la
motró bandas a 273 nm (A: 0,710) y 215 nm presencia de compuestos aromáticos como (A: 2,112). Las bandas de absorción de 215 por ejemplos: carvacrol (IK=1296) (8); 2-
y 218 nm indican la presencia de compues- Isopropil-1-metoxi-4-metilbenceno (7) y el
tos insaturados como por ejemplo el germa- beta-Cimeno (3) (Fuertes C., 2001)
creno D (10); gamma-Terpineno o el beta-
Figura 6: mililitros (mL) de aceite esencial obtenidos en distintos tiempos del proceso de extracción Figura 7: mLde aceite esencial obtenido por cada 100 gramos de Origanum syriacum L. seco en dis-tintos tiempos del proceso de extracción Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor Caracterización química del aceite esencial mente. La sumatoria de los porcentajes de del Origanum syriacum L. los componentes mayoritarios recién men- cionados contribuye al 67,1% de la compo- sición total de la esencia correspondiendo un (A, B y C) se muestran los componentes 32,9% a los restantes compuestos presentes químicos del aceite esencial de Origanum en menor proporción. En el t2 el aceite esen- syriacum L. que corresponden a las 2, 4 y 6 cial contiene el 80% de los mismos compo- horas del proceso de extracción respectiva- nentes que el aceite esencial del t1, haciendo mente, así como los porcentajes correspon- salvedad de que en el t2 y t3 no volvieron a dientes a cada compuesto. aparecer el óxido de ledeno (II) (13) y (+)-2-
El ensayo analítico realizado por croma- careno (18), lo que significa que éstos com-
tografía gaseosa acoplada a espectrometría puestos poseen mayor volatilidad que los de masas (GC-MS) reveló que el componen- demás componentes y que su separación te mayoritario de la esencia es el compuesto completa del espécimen vegetal podría ser fenólico 2-hidroxi-p-cimeno [carvacrol sufieciente en dos horas de extracción, sin (8)] en los tres tiempos del proceso de ex-
embargo en t2 aparecieron nuevos compo- nentes como el epóxido isoaromadendreno, 1: 19,2%; t2: 11,9% y t3: 19,5%), con un promedio del 16,9%. La ausencia de (+)-4-careno (23), 3-careno (24) y el alfa-
timol (Figura 2) testada a través del método bisaboleno (21), que no aparecieron en el t1.
analítico GC-MS, indica que la especie ve- En cuanto al contenido químico del aceite getal Origanum syriacum L. es del quimioti- esencial del t3 se puede mencionar que el po eminentemente carvacrol, como lo men- 68,2% de los compuestos coinciden con el ciona USAID 2008, La predominancia de contenido químico de la esencia del t2. El carvacrol y la ausencia de timol en la espe- alfa-bisaboleno (21) y el 3-careno (24) se
cie vegetal mencionada, se podría explicar encontaron ausentes en la esencia del t3, sin en el hecho de que cada compuesto precisa embargo en el contenido químico de ésta de enzimas específicas que dirigen su bio- última aparecieron nuevos compuestos como síntesis (D´Antuono et al., 2000; Deighton et el elixeno, (-)-alfa-terpineol (26), tras-retinal
al., 1993), lo que permite decir, que en este (28) y copaeno (29), lo que significa que
caso la especie vegetal Origanum syriacum éstos últimos compuestos necesitarían pro- L., carece de las enzimas involucradas en la bablemente de 6 horas para separarlos com- biosíntesis del timol. El carvacrol (IK=1296) pletamente del espécimen vegetal en estu- (8) es un fenol isomérico del timol (Figura
2) Otros componentes mayoritarios después del carvacrol (IK=1296) (8) son: (-)-
La morfología y anatomía corresponden a la gamma terpineno (4) (monoterpeno); cario-
especie vegetal Origanum syriacum L. El fileno (9) (sesquiterpeno) y (+)-sabineno (1)
aceite esencial obtenido a partir de la men- (monoterpeno bicíclico), cuyos porcentajes cionada especie, utilizando el método de promedios obtenidos de los tres tiempos son destilación por arrastre de vapor de agua 13,6; 10,9; 9,78; 8,93; y 6,97% respectiva- presentó rendimientos del 0,531, 0,708 y Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor 0,474% correspondientes a las 2, 4 y 6 horas Argüeso A., D'A. 1986. Manual de Técni- del proceso de extracción, porcentajes que cas en Histología Vegetal. Buenos Aires: sumados generó un porcentaje del 1,71% Editorial Hemisferio Sur. correspondiente al proceso de extracción Bendahou, M.; Muselli, A.; Grignon- global. Los valores obtenidos de parámetros Dubois, M.; Benyoucef, M.; Desjobert, físicos indican que el aceite esencial presen- J.-M.; Bernardini, A.-F.; Costa, J., Anti- ta elevada pureza y el contenido químico microbial activity and chemical composi- determinado por el método GC-MS reveló tion of Origanum glandulosum Desf. Es- que la esencia pertenece al quimiotipocarva- crol (IK=1296) ( =16,9%.), seguido de Calderón, E. 1963. Guía para análisis de otros compuestos como el (-)-terpinen-4-ol plantas y notas prácticas sobre fitoquími- ( =13,6%.);2-isopropil-1-metoxi-4 ca. Universidad Nacional: Bogotá. benceno ( = 10,9%.); gamma terpineno ( = Chishti S., Kaloo, Z., and Sultan, P. 2013. 9,78%.); cariofileno ( =8,93%) y (+)- sabineno ( = 6,97%), máximos al UV de Origanum – A review. International 209, 215, 218 y 274 nm que indican la pre- Journal of Advanced Research, Volume sencia de compuestos insaturados (53,4%) y 1, Issue 8, 75-84. En: Journal homepage: aromáticos (37,8%). Se estableció un lazo importante de colaboración entre el sector público y el privado. Corrêa R., Pereira J., Soares E., De Oliveira C., De Castro E., Da Silva R. 2009. Ca- REFERENCIAS BIBLIOGRAFÍCAS
racterísticas anatômicas foliares de plan- tas de orégano (Origanum vulgare L.) Alvarez C. A. 1999. Determinación y cuanti- submetidas a diferentes fontes e níveis de ficación de la capacidad antimicrobiana y adubação orgânica. Maringa, v. 31 (3), antioxidante de las fracciones polares del orégano (Origanum vulgare L.). Tesis de D'Antuono L., Galletti G. y Bocchini, P. Maestría. Facultad de Ciencias Químicas. 2000. Variability of Essential Oil Content Universidad Autónoma de Chihuahua. and Composition of Origanum vulgare L. Aranda J. et. al. 2009. Caracterización del Populations from a North Mediterranean aceite esencial de orégano liso (Polio- Area (Liguria Region, Northern Italy), mintha longiflora Gray) de la localidad Annalsof Botany, 86(3), 471-478. Infiernillo en el municipio de Higueras, Deighton N. et. al. 1993. Identification by N.L., Mexico. Revista Salud Pública y EPR spectroscopy of Carvacrol and Nutrición, Volumen 10, número 8. Thymol as the major sources of free Arcila-Lozano C., Loarca-Piña, G., Lecona- radicalsin the oxidation of plant essential Uribe, S., y González de Mejía, E. 2004. oils, J. Sci. Food Agric., 63(2), 221-225. El orégano: propiedades, composición y Fuertes C. et. al. 2001. Estudio comparativo actividad biológica de sus componentes. del aceite esencial de Minthostachys mo- Archivos Latinoamericanos de Nutrición, llis (Kunth) Griseb "Muña" de tres regio- 54(1), 100-111. nes peruanas por cromatografía de gases Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor y espectrometría de masas. Ciencia e In- Murillo E. et. al. 2004. Caracterización Físi- vestigación, Volumen IV (I) co-Química del aceite esencial de alba- Fundación Integra. 2014. «Orégano: Carac- haca. II. Revista Colombiana de Quími- terísticas». Región de Murcia Digital. ca, Volumen 23, Número 2. Pag. 139- Accedido octubre 10. Proyecto de Cooperación UE-Perú en mate- ria de Asistencia Técnica relativa al co- mercio. 2004. Estudio de Factibilidade la Producción de Orégano orgánico y sus Fundación Integra. 2014. «Orégano: Presen- derivados en Tacna. Perú. tación». Región de Murcia Digital. Ac- The Plant List. 2013. Version 1.1. Published
on the Internet; http://www.theplantlist.org/(accessed 1st January). Tropicos (2014). En: www.mobot.org/Name/100234908 USAID y Paraguay Vende. 2008. Asistencia Hostettmann, K. 2008. Manual de estrate- Técnica en el Agronegocio del Orégano. gias para el aislamiento de productos na- Task Order N. 346. Dirigida a Empresas turales bioactivos. Bogotá-Colombia: del Sector Privado Paraguayo asistidas Convenio Andrés Bello. por el Programa Paraguay Vende, Con- Leffingwell, J., Alford, E., Leffinwell, D., et al. 2013. Identification of the Volatile Asunción: United States Agency for In- Constituents of Cyprian Latakia Tobacco ternational Development. by Dynamic and Static Headspace Anal- World Health Organization. 1998. Quality control methods for medicinal plant ma- Metcalfe, C. and Chalk, L. 1988. Anatomy terials. Geneva-Suiza. of the dicotyledons. 2 ed. Oxford: Cla- Zheng W. and Shiow Y. W. 2001. Antioxi- dant Activity and Penolic Compounds in Motic China Group. 2006. Motic Images Selected Herbs. J. Agric. Food Chem. 49, Plus versión 2.0. Software de computa- dora para microscopia digital. Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor Tabla 7A. Composición química del aceite esencial de Origanum syriacum L. muestreado a las 2 horas del proceso de extracción Nombre del com-
Cantidad
Nombre del compuesto
Estructura química
Cantidad
puesto químico
relativa (%)
químico
relativa
(+)-Sabineno (1)
(-)-Terpinen-4-ol (6)
alfa-Terpineno (2)
beta-Cimeno (3)
Carvacrol (Isotimol) (8)
gamma-Terpineno (4)
Cariofileno (9)
Biciclo [3.1.0] hexan- metiletil)-, (1.alfa., 2. Germacreno D (10)
beta., 5. alfa.) (trans- hidrato de Sabine- Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor
Tabla 7B. Composición química del aceite esencial de Origanum syriacum L. muestreado a las 2 horas del proceso de extracción
Nombre del compuesto
Estructura
Cantidad
Nombre del compuesto
Estructura química
Cantidad
químico
química
relativa
químico
relativa
Biciclo [3.1.0] hexan-2- ol, 2-metil-5-(1-metiletil)-, (1.alfa., 2. Terpineno 4-acetato (16)
alfa., 5. alfa.) (cis-
hidrato de sabineno (11)
Beta-Bisaboleno (12)
(-)-Spatulenol (17)
Oxido Ledeno-(II) (13)
(+)-2-Careno (18)
1,4,7-Cicloundecatrieno Germacreno B (19)
[1aR- (1a. alfa., 4a. be- ta., 7. alfa., 7a. beta., 7b. alfa.)-4-metileno-1,1,7- Delta-Cadineno (20)
Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor Tabla 8A. Composición química del aceite esencial de Origanum syriacum L. muestreado a las 4 horas del proceso de extracción
Nombre del compuesto
Estructura
Cantidad
Nombre del compuesto
Estructura química
Cantidad
químico
química
relativa
químico
relativa
Biciclo [3.1.0] hexan-2-ol, 2-metil-5-(1- (+)-Sabineno (1)
metiletil)-, (1.alfa., 2. alfa., 5. alfa.) (cis-hidrato de sabineno (11)
alfa-Terpineno (2)
(-)-Terpinen-4-ol (6)
beta-Cimeno (3)
gamma-Terpineno (4)
Carvacrol (Isotimol) (8)
1,4,7-Cicloundecatrieno Cariofileno (9)
Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor Tabla 8B. Composición química del aceite esencial de Origanum syriacum L. muestreado a las 4 horas del proceso de extracción
Nombre del compuesto
Estructura
Cantidad
Nombre del compuesto
Estructura química
Cantidad
químico
química
relativa
químico
relativa
Delta-Cadineno (20)
dreno (22)
Germacreno B (19)
(-)-Spatulenol (17)
Terpineno 4-acetato (16)
(+)-4-Careno (23)
Beta-Bisaboleno (12)
Germacreno D (10)
Alfa-Bisaboleno (21)
3-Careno (24)
Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor Tabla 8C. Composición química del aceite esencial de Origanum syriacum L. muestreado a las 4 horas del proceso de extracción
Nombre del compuesto
Estructura
Cantidad
Nombre del compuesto
Estructura química
Cantidad
químico
química
relativa
químico
relativa
Metoximesitileno (25)

Tabla 9A. Composición química del aceite esencial de Origanum syriacum L. muestreado a las 6 horas del proceso de extracción
Nombre del compuesto
Estructura
Cantidad
Nombre del compuesto
Estructura química
Cantidad
químico
química
relativa
químico
relativa
(+)-Sabineno (1)
gamma-Terpineno (4)
Biciclo [3.1.0] hexan-2- dreno (22)
metiletil)-, (1.alfa., 2. beta., 5. alfa.) (5)
Biciclo [3.1.0] hexan-2-
ol,
beta-Cimeno (3)
metiletil)-, (1.alfa., 2. alfa., 5. alfa.) (11)
Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor Tabla 9B. Composición química del aceite esencial de Origanum syriacum L. muestreado a las 6 horas del proceso de extracción
Nombre del compuesto
Estructura
Cantidad
Nombre del compuesto
Estructura química
Cantidad
químico
química
relativa
químico
relativa
Carvacrol (Isotimol) (8)
Cariofileno (9)
Germacreno D (10)
1,4,7-Cicloundecatrieno Beta-Bisaboleno (12)
(-)-alfa-terpineol (26)
Terpineno 4-acetato (16)
(-)-Spatulenol (17)
Elixeno (27)
Steviana, Vol. 6. 2014. Martínez et al. Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syriacum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor Tabla 9C. Composición química del aceite esencial de Origanum syriacum L. muestreado a las 6 horas del proceso de extracción
Nombre del compuesto
Estructura
Cantidad
Nombre del compuesto
Estructura química
Cantidad
químico
química
relativa
químico
relativa
[1aR- (1a. alfa., 4a. beta., 7. alfa., 7a. beta., 7b. (+)-4-Careno (23)
Cicloprop[e]azuleno (15)
trans-Retinal (28)
(-)-Terpinen-4-ol (6)
Copaeno (29)
Delta-Cadineno (20)
El género Pleurotus (Pleurotaceae-Basidiomycota) en Paraguay
Alma Flecha Rivas, Barbara De Madrignac, Michelle Campi Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad Nacional de Asunción. Dirección de Investigación
Email del autor:
El género Pleurotus (Pleurotaceae-Basidiomycota) en Paraguay. El presente trabajo describe tres
especies del género Pleurotus y dos variedades, siendo nuevo registro para el Departamento Central
Pleurotus albidus y nueva cita para el país Pleorutus djamour var. cyathiformis, Pleurotus djamor var.
roseus y Pleurotus cystidiosus. Se describen los rasgos macroscópicos distintivos de cada especie, las
estructuras microscópicas y la posición taxonómica.
Palabras claves: Agaricales, nuevo registro, Departamento Central
The Genus Pleurotus (Pleurotaceae-Basidiomycota) in Paraguay. The present paper describes three
species of Pleurotus and two varieties, being new record for the central department Pleurotus albidus and
new citation for the country Pleorutus djamour var. cyathiformis, Pleurotus djamor var. roseus and
Pleurotus cystidiosus. The distinguishing features of each species, the macroscopic and microscopic struc-
tures, and their taxonomic position are described.

Keys words
: Agaricales, new record, Departamento Central

INTRODUCCIÓN

La posición sistemática del género Pleuro- del género son el píleo flabeliforme a deme- tus (Fr.) P. Kummer ha sido ampliamente diado que se une al sustrato por un estípite discutida. Singer (1951) ubica al género Pleu- corto, sólido y grueso que puede ser lateral, a rotus en la familia Polyporaceae. Corner veces excéntrico, central o incluso ausente. (1981) agrupa a los géneros Pleurotus, Lenti- Las laminillas son decurrentes, apretadas o nus Fr. y Panus Fr. según su sistema hifal. ampliamente separadas. El margen es liso o Pegler (1983) asevera que los géneros Lenti- crenado e involuto. El sistema hifal es mono- nus y Pleurotus son afines pero independien- mítico o dimítico, las hifas son hialinas y con tes entre sí. Finalmente según estudios filo- o sin septos. La esporada es blanca, crema o genéticos realizados por Hibbett and Donog- lila pálido. Pueden crecer de manera solitaria hue (1995) separan a Lentinus, Panus, Pleuro- o cespitosa (Pegler 1983). El conocimiento tus y Neolentinus Redhead & Ginns en géne- del género Pleurotus en Paraguay es escaso, ros independientes, ubicándose Pleurotus en Spegazzini (1883, 1888, 1922) cita por prime- el orden Agaricales, familia Pleurotaceae ra vez para el país en el departamento Central (Hibbett et al. 2007). El género presenta espe- a ocho especies, aunque muchas de ellas han cies lignícolas encargadas de descomponer sido actualmente transferidas a otros géneros lignocelulosa de manera eficiente, son am- o son especies que no se han vuelto a descri- pliamente cultivados y posee varias especies bir. Este contribuye con el registro de tres que se desarrollan y consumen en todo el especies del género ya que hasta la fecha en mundo (Hernandéz et al. 2005; Gayosso 2001; Paraguay no existe registro de las mismas. Zadrazil 1978). Las características distintivas Steviana, Vol. 6, 2104, pp. 70 - 79 Recibido 3 julio 2014; aceptado 4 noviembre 2014 Steviana, Vol. 6. 2014. Flecha et al. El género Pleurotus (Pleurotaceae-Basidiomycota) en Paraguay MATERIALES Y MÉTODOS
cm, excéntrico a lateral, curvado, cilíndrico, macizo ensanchándose hacia la base. Contex-
Las muestras fueron obtenidas en un área to delgado, húmedo cuando fresco y de con-
urbana del departamento Central. Las colec- sistencia flexible, en seco papiráceo a coriá- ciones se realizaron en los meses de octubre, ceo. Carne blanca y flexible de olor suave y noviembre y diciembre de 2013. De cada área agradable. Esporada no observada.
se obtuvieron coordenadas geográficas con un Basidiosporas 8-10 x 3,5-4 µm, Q: 2-2,57
GPS Garmin etrex. Los ejemplares fueron µm, Qx: 2,32 µm, N: 1, n: 10, cilíndricas con fotografiados, descriptos macroscópicamente apículo en vista lateral, hialinas en KOH, in situ según Wright and Albertó (2002) y inamiloides, de paredes delgadas, lisas, posteriormente deshidratados. Las micrograf- congófilas. Basidios 20-30 x 4-8 µm estre-
ías fueron montadas en KOH al 5%, Reactivo chamente claviformes, tetrasporados con este- de Melzer, Floxina y Rojo Congo. Se utilizó rigmas de hasta 4 µm longitud. Queilocisti-
microscopio óptico con objetivos de 40X y dios y Pleurocistidios no observados. Sub-
100X con aceite de inmersión para la identifi- himenio bien diferenciado con células globo-
cación de estructuras. El material colectado sas. Trama himenoforal irregular, hifas de 3-
fue depositado en el Herbario FACEN. Se 5 µm de diám. Pileipellis en un cutis, hifas
utilizó la base de datos del Index Fungorum con fíbulas de paredes delgadas. Hifas del para nombrar correctamente a las especies y contexto entrelazadas de paredes simples, hialinas en KOH. Estípitepellis formada por
hifas hialinas, septadas de paredes delgadas RESULTADOS
dispuestas en forma paralela. Hábitat y Distribución: Gregarios, cre-
Pleurotus djamour var. cyathiformis ciendo sobre troncos muertos, en zona urbana.
Corner, Beihefte zur Nova Hedwigia 69: 123 Registrado anteriormente para Misiones, Ar- (1981) (Figura 1, 2) gentina (Lechner & Wright, 2004). El presen- te es el primer registro para Paraguay. Basidiomas cespitosos, pleurotoides. Píleo
Material estudiado: PARAGUAY, De-
5-15 cm de diámetro, demediado a infundibu- partamento Central, Ciudad de Asunción liforme. Color blanco en el centro y se va (25°17'35''S 57°34'48''W). 29/10/2013, leg. oscureciéndose hacia el margen, tornándose Flecha, A., De Madrignac, B & Campi, M. amarillento con la madurez. Superficie tor-
mentosa en el centro y glabra hacia el margen. Observaciones: P. djamor se caracteriza
Escamas caedizas. Margen entero, ondulado
por presentar el contexto dimítico (Lechner et e involuto, hasta 1mm de grosor, en ejempla- al, 2004). P. djamor var. cyathiforme se dife- res maduros plano-convexo de bordes irregu- rencia de las restantes variedades de la misma lares. Laminillas blancas, anchas, decurren-
especie por la forma y coloración de su píleo tes, próximas con bordes lisos amarillentos. (Lechner et al. 2004). Lamélulas presentes. Estípite 2-4 x 0,2-0,7
Steviana, Vol. 6. 2014. Flecha et al. El género Pleurotus (Pleurotaceae-Basidiomycota) en Paraguay Figura 1. Pleurotus djamor var. cyathyformis: a-b: Basidioma; c-d: Himenóforo; e: Estípite, f: Basidiosporas; g: Trama; h: Subhimenio; i: Basidio; j: Hifas con fíbulas. Escala: a, b, c, d y e = 15 cm, f, g, h, i y j = 5µm. Figura 2: Pleurotus djamor var. cyathiformis. a-b: Basidioma; c: Basidiosporas; d: Basidios; e: Pileipellis, hifa fibulada. Steviana, Vol. 6. 2014. Flecha et al. El género Pleurotus (Pleurotaceae-Basidiomycota) en Paraguay Pleurotus djamor var. roseus Corner, Beihe-
aspecto romboide. Pileipellis con hifas gene-
fle zur Nova Hedwigia 69: 123 (1981). (Figura rativas y esqueletales ampliamente ramifica- das. Sistema hifal dímitico. Hábitat y distribución: Saprófito, grega-
Basidiomas gregarios, saprófito, de hábito
rio, creciendo sobre tronco en descomposición pleurotoide. Píleo 2-10 x 2–5 cm flabeliforme,
demediado. Color rosa-salmón cuando fresco, (Lechner et al. 2004) y Brasil (De Meijer volviéndose castaño pálido cuando seco. Su-
2008). El presente es el primer registro para perficie lisa. Margen crenado, liso, concoloro
al píleo. Laminillas decurrentes, subdistantes
Material examinado: PARAGUAY, De-
a distantes, de color rosa pálido en fresco, partamento Alto Paraná, refugio Biológico ocres cuando seco. Lamélulas presentes. Estí-
54°38′00″O. pite 2–4 x 1–1,5 cm, central, macizo, fibroso,
26/02/2014. Leg. De Madrignac, B. & Gullón, concoloro al píleo, coriáceo cuando seco. Contexto carnoso, carne blanca, húmeda de
Observaciones: P. djamor var. roseus se
olor suave y agradable. Esporada no obser-
caracteriza por presentar el basidioma de colo- ración salmón a rosa pálido. En cuanto al sub- Basidiosporas (12)8-10 x 3-4 µm, Q= 2–3
himenio, ambas variedades, P. djamor var. µm, Qx= 2,35 µm, N: 1, n: 15, oblongas, hia- roseus y P. djamor var. cyathyformis lo pre- linas, lisas de paredes delgadas. Basidios 15-
sentan bien desarrollado pero se diferencian 20 x 6-10 µm, tetraspóricos y claviformes. por las formas de las células romboides y Pleurocistidios no observados. Queilocistidi-
redondeadas respectivamente (Lechner, et al., os 20-32 x 6-8 langeriformes a fusiformes.
2004). Otra variedad de la misma especie es Trama himenoforal completamente irregular
P. djamor var. djamor que presenta una colo- con hifas generativas hialinas de paredes del- ración del píleo marrón con una superficie lisa gadas e hifas esqueletales hialinas con paredes y glabra (Lechner et al. 2004), la cual no ha gruesas. Fíbulas presentes. Subhimenio bien
sido registrada para Paraguay. desarrollado con elementos irregulares de Figura 3. Pleurotus djamor var. roseus: a-b: Basidioma; c: Himenóforo; d: Basidios; e: Basidiosporas; f: Queilocistidios. Escala: a, b y c= 10 cm; d, e y f= 5 µm Steviana, Vol. 6. 2014. Flecha et al. El género Pleurotus (Pleurotaceae-Basidiomycota) en Paraguay Figura 4: Pleurotus djamor var. roseus a-b: Basidioma; c: Basidosporas; d: Basidios; e: Queilocistidios
Pleurotus albidus
(Berk.) Pegler, Kew Bulle-
Basidiosporas de 7-9 x 3-4 µm, Q: 1,5-2,5
tin, Additional. Serie 10: 219 (1983) µm, Qx: 1,8 µm, N= 1, n=10; cilíndricas a ≡ Lentinus albidus Berk., London Journal of elíptico-elongadas, hialinas en KOH, lisas, Botany 2: 633 (1843) (Figura 5, 6) paredes simples con apículo lateral, inamiloi- des. Basidios de 25-30 x 4-5 µm, claviformes
Basidiomas cespitosos. Píleo 3-15 cm de
tetrasporados, hialinos, paredes simples con diámetro, convexo con depresión central, in- grandes esterigmas de 1-5 µm. Pleurocisti-
fundibuliforme, demediado a circular de color dios no observados. Queilocistidios de 25–35
blanco-amarillento. Superficie con escamas x 4-5 µm. capitados, cilíndricos, de pared caedizas. Margen involuto, entero y en algu-
delgada. Subhimenio poco diferenciado de
nos ejemplares lobular, carnoso de 0,1 cm de 10–15 µm. Trama himenoforal irregular con
grosor. Carne delgada y blanca. Olor: fúngico
hifas hialinas de 3-5 µm de paredes delgadas, suave. Laminillas decurrentes subdistantes,
sin septos, ramificadas, inamiloides. Fíbulas de 0,1–0,2 cm de distancia interlaminar, muy presentes. Pileipellis en cutis, con hifas de 4–
amarillas al secarse. Con lamélulas. Estípite
5 µm de paredes simples, con septos y fíbulas. de 3–7 x 0.5–1.5 cm, excéntrico a lateral, Contexto dimítico. Hifas generativas de 2–3
cilíndrico, macizo, fibroso de color blanco con µm muy ramificadas de paredes simples, sin algunas escamas castañas. Steviana, Vol. 6. 2014. Flecha et al. El género Pleurotus (Pleurotaceae-Basidiomycota) en Paraguay septos, inamiloides. Hifas esqueletales de 3–5 llenta de las láminas al secarse, en tanto que las demás especies examinadas no presentan Hábitat y Distribución: Gregarios, cre-
cambios en la coloración en las láminas. En ciendo sobre tronco de árbol caído. Conocido P. albidus existe una discrepancia en cuanto a anteriormente para Paraguay, departamento la presencia o ausencia de estructuras vegeta- tivas como los queilocistidios y pleurocisti- (Lechner et al. 2004), Brasil (Pegler 1988), dios; Según Wright and Albertó (2002), posee México (Moreno-Fuentes et al. 2006) India pleurocistidios y queilocistidios, en tanto (Kumari et al. 2012). que, Wright et al (2008) aseguran que los Material examinado: PARAGUAY, De-
queilocistidios se encuentran ausentes y no menciona la presencia de pleurocistidios. En 57°34'28,2''W), 21/11/13, leg. Flecha, A., De el material examinado, se encontraron queilo- Madrignac, B. & Campi (FACEN-048). cistidios los cuales coincidían en forma y me- Observaciones: Pleurotus albidus se ca-
dida con los de Wright and Albertó (2002). racteriza por presentar una coloración amari- Figura 5. Pleurotus albidus a, b, c: Basidioma; d: Basidiosporas; e: Pileipellis: Hifas con fíbulas; f: Basidio; g: Trama himenoforal; h: Pileocistidios. Escala: a, b y c: 15 cm, d, e, f y h: 5µm. Steviana, Vol. 6. 2014. Flecha et al. El género Pleurotus (Pleurotaceae-Basidiomycota) en Paraguay Figura 6: Pleurotus albidus a-b: Basidioma; c: Basidiosporas; d: Basidios; e: Queilocistidios; f: Pileipellis, Hifas fibuladas.
Pleurotus cystidiosus O. K. Miller, Mycologia
estrecha, seco de color blanco brillante con 61: 889 (1969). (Figura 7, Lámina 8). pubescencia, micelio basal tomentoso abun- dante y rizomorfos. Contexto carnoso. Carne
Basidioma pleurotoide, solitario. Píleo 3–
blanca, flexible tornándose coriácea cuando 6,5 cm al principio enrollado a plano-convexo seco y toma una coloración amarillenta. Olor con una leve depresión central, seco. Color fúngico suave y agradable. Esporada no ob-
crema con escamas marrones en la superficie.
Superficie con escamas marrones que se ex-
Basidiosporas 8-11 x 4 µm de diámetro,
tienden del margen al centro del píleo. Mar-
Q= 2- 2,75 µm, Qx = 2,38 µm, N: 1, n= 15 gen entero e involuto, lobulado. Laminillas
oblongo–elipsoidales, hialinas, lisas inamiloi- decurrentes, distantes blancas amarillentas des. Basidios 25-30 µm, hialinos, clavifor-
con borde entero. Con lamélulas. Estípite 2-3
mes, tetraspóricos. Pleurocistidios 30-57 µm
x 0,3-0,5 cm, excéntrico, cilíndrico de base hialinos claviformes, ventricosos. Queilocis-
Steviana, Vol. 6. 2014. Flecha et al. El género Pleurotus (Pleurotaceae-Basidiomycota) en Paraguay tidios no observados. Subhimenio levemente
herhuber 1991). El presente es la primera cita visible con elementos angulares hialinos en KOH. Trama himenoforal irregular con hifas
Material examinado: PARAGUAY, De-
generativas de 5-8 µm, hialinas, sin septos e partamento Central, Facultad de Ciencias hifas de paredes gruesas de 5 µm de diámetro. Veterinarias (25°14'42,7''S 57°34'28,2''W). Fíbulas presentes. Pileipellis con hifas parale-
3/04/14, leg. Flecha, A. (FACEN, 49). las de 6-10 µm de diám. Pileocistidios de
Observaciones: está especie es solitaria y
40x10 µm fusiformes, cilíndricos y langeri- se caracteriza por presentar abundantes pileo- formes. Fíbulas presentes. Contexto mono-
cistidos. Lechner et al (2004) remarcan la mítico formado por hifas hialinas de paredes presencia de pleurocistidios y ausencia de queilocistidios, sin embargo, en su descrip- Hábitat y Distribución: Saprófito, solita-
ción original Miller (1969) destaca la presen- rio, sobre troncos en putrefacción, cercano al cia tanto de pleurocistidos como queilocisti- bosque de pinos. Registrado anteriormente dios. En el material examinado no se observa- para Buenos Aires, Argentina (Lechner et al. ron queilocistidio. 2004), para la región de Paraná, Brasil (Rait- Figura 7. Pleurotus cystidiosus. a, b, f y g: Basidioma; c: Basidiosporas; d: Hifas con fíbulas (Pilei-pellis); e: Pileipellis; h: Pileocistidios; I: Trama himenoforal. Escala: a, b, f y g = 15 cm; c, d, e, h y i= 5µm. Steviana, Vol. 6. 2014. Flecha et al. El género Pleurotus (Pleurotaceae-Basidiomycota) en Paraguay Figura 8: Pleurotus cystidiosus a: Basidioma; b: Basidiosporas; C: Basidios; d: Pleurocistidios; e: Pileocistidos; e: Pileipellis, hifas fibuladas. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
tificación Tesis Maestría en Ciencias Bio- tecnológica. Universidad de Colima. Corner, E. J. H. 1981. The agaric genera Hernández, D.; Andren, L. y Mata, G. 2005. Lentinus, Panus and Pleurotus whit partic- Caracterización bioquímica de seis sepas ular reference to Malaysian species. Beihe- de Pleurotus. Rev. Mexicana de Micologia fle zur Nova Hedwigia 69: 1-169. De Meijer, A. 2008. Macrofungos Notáveis Hibbett, D. Binder, M. Bischoff, J. Black- das Florestas de Pinheiro do Paraná. Em- well, M. Cannon, P. Eriksson, O. brapa Florestas. Colombo, Paraná Brasil. Huhndorf, S. James, T. Kirk, P. Cking, R. Lumbsch, H. T. Lutzoni, F. Matheny, P. Gayosso, M. 2001. Caracterización de los B. Mclaughlin, D. Powell, M. J. Redhead, componentes de un extracto de primordios S. Schoch, C. L. Spatafora, J.W. joost a. de Pleurotus ostreatus que induce sus fruc- Stalpers, J. A. Vilgalys, R Aime, M. C. Aptroot, A. Bauer, R. Begerow, D. gerald Steviana, Vol. 6. 2014. Flecha et al. El género Pleurotus (Pleurotaceae-Basidiomycota) en Paraguay l. Benny, G. L. Castlebury, L. A. Crous, Hidalgo. Su primer registro en México. P.W. Dai, Y. C. Gams, W. Geiser, D. M. Revista mexicana de Micología 22: 41-47. Griffith, G. Gueidan, C. Hawksworth, D. Pegler, D. N. 1983 The genus Lentinus: a L. Hestmark, G. Hosaka, K. Humber, R. A. world monograph. Kew Bulletin Addition- Hyde, K. D. Ironside, J. E. Koljalg, U. al Series 10: 281. Kurtzman, C. P. Larsson, K. Robert _1988. Agaricales of Brazil de- Lichtwardt, R. Longcore, J. miadlikowska, scribed by M. J. Berkeley. Kew Bulletin J. Miller, A. Moncalvo, J. M. Mozley- Standridge, S. Oberwinkler, F. Parmasto, Singer, R. 1951. The Agaricales in modern E. Reeb, V. Rogers, J. D. Roux, C. taxonomy. Lilloa 22: 1-832. Ryvarden, R. Sampaio, J. P. Schüßler, A. Spegazzini, C. 1883. Fungi Guaranitici. Pugi- Sugiyama, J. Thorn, R. G. Tibell, L. llus I. Anales de la Sociedad Científica Untereiner, W. A. Walker, C. Wang, Z. Argentina 16(5):247. Weir, A. Weiss, M. White, M. Winka, K. 1888. Fungi Guarinitici. Pugi- Yao, Y. Zhang, N. 2007. A higher-level llus II. Anales de la Sociedad Científica phylogenetic classification of the fungi. Argentina 26(1): 5-74. Mycological research 3: 551-554. 1922. Fungi Paraguayenses. Hibbett, D.S., Donoghue, M.J. (1995). Evolu- Anales del Museo Nacional de Historia tionary diversity of polypore fungi: a mo- Natural Buenos Aires 31: 355-450. lecular phylogenetic perspective. American Wright, J. Albertó, E. 2002. Hongos. "Guía de Journal of Botany 82 (6): 78-79. la Región Pampeana, Tomo I. Hongos con Kumari, B., Upadahyay, R. C. and Sapan, S. laminillas. Editorial L.O.L.A. Buenos Ai- 2012. Mycological observation on Genus res. Argentina. 279 pp. Pleurotus from India. Global Journal of Wright, L. Lechner, B & Popoff, O. 2008. Environmental Research 6(3): 80-83. Hongos. Atlas pictórico del Parque Nacio- Lechner, B., Wright, J. and Albertó, E. 2004. nal Iguazú. Editorial L.O.L.A. Buenos Ai- Pleurotus res. Argentina. 227 pp. Mycología 96(4): 845 – 848. Miller,O. K. 1969. A new species of Zadrazil, F. 1978. Cultivation of Pleurotus Pleurotus whit a coremioid imperfect ostreatus en S.T. Chang, W.A. Hayes stage. Mycologia 61: 887-893. (Eds): The Biology and cultivation of Edi- Moreno-Fuente, A. y Bautista-Nava, E. 2006. ble Mushrooms. London Academic Press. El hongo patón Pleurotus albidus, en Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del
Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago
Ypacarai
Bonifacia Benítez1, María Vera1, Siemens Bertoni2 1 Laboratorio de Análisis de Recursos Vegetales, Departamento de Biología, Facultad de Ciencias Exac-
tas y Naturales, Universidad Nacional de Asunción
2Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional de Asunción
E mail del autor
Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo
Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai
. El Lago Ypacaraí está ubicado al este de Asunción
(57 y 58º S; 25 y 26º W). Se encuentra en una planicie de cota inferior a los 100 m. s. n. m., al sur de la
Cordillera de los Altos (450 m); está formado por la confluencia de los ríos Yagua-resa u, Pirayú y Ypucu.
El objetivo de este trabajo fue evaluar el estado actual de los remanentes de comunidades vegetales
existentes en la cuenca de un efluente y afluente del Lago Ypacarai. La metodología aplicada fue identifi-
car y analizar los remanentes de comunidades vegetales; se colectó, procesó y determinó material de
herbario, se caracterizó cada comunidad vegetal y se analizó la estructura horizontal de la vegetación
(abundancia, dominancia e Índice de Valor de Importancia Familiar). Las comunidades vegetales identifi-
cadas fueron: Bosque en galería de altura media, Bosque ribereño de altura media, Bosque alto ribereño,
Sabana Palmar de Copernicia alba y poblaciones de especies acuáticas entre las que se mencionan a
Eichhornia crassipes (camalotales), Typha spp (totorales), Cyperus giganteus (pirizales) y Thalia genicula-
ta
(peguajosales), acompañadas de poaceas y cyperaceas acuáticas; además de asociaciones de Eryth-
rina crista-gal i
(ceibo) y Sapium haematospermum (kurupika'y).
Palabras claves: Lago Ypacarai, Abundancia y dominancia, Ecología
Analysis of the current state of the remnants of plant communities from basins of the Salado river
and the Pirayú stream in the catchment area of the Ypacarai lake.
The main purpose of this research
was to identify and analyze the remnants of plant communities in the basin of an effluent and affluent of
the Ypacarai lake. The methodology had the following steps: study site selection, sampling design, collec-
tion and processing of herbarium material, taxonomic determination, characterization of the community,
analysis of data such as abundance and dominance, and determination of the Importance Value Index of
the families. In addition, a comparative analysis with previous studies was performed. The studies revealed
the presence of the following communities: medium-height gallery forest , medium-height riparian forest ,
high riparian forest, palmar savannah composed of Copernicia alba, and populations of aquatic species
among which: Eichhornia crassipes (camalotales), Typha spp (totorales), Cyperus giganteus (pirizales),
Thalia geniculata (peguajosales) are mentioned, accompanied by aquatic Poaceae and Cyperaceae; in
addition to associations between Erythrina crista-gal i (ceibo) and Sapium haematospermum (kurupika'y) .
Key Words: Ypacarai Lake, Abundance and dominance, Ecology
La formación geológica está constituida por el conglomerado de base y las areniscas arcósicas y sacaroides; los sedimentos del El Lago Ypacaraí, está ubicado al este de lecho son limos orgánicos, el valle está cu- Asunción cuyas coordenadas geográficas son bierto por sedimentos cuaternarios que forman las siguientes: 57 y 58º S; 25 y 26º W. Se una planicie aluvial con sedimentos predomi- encuentra en una planicie de cota inferior a los nantemente arenosos (Ritterbusch, 1988). 100 m s. n. m., al sur de la Cordillera de los Según el mismo autor su cuenca es de origen Altos con 450 m sobre el nivel del mar; está tectónico, producida por las fallas principales formado por la confluencia de los ríos Yagua- del sistema, por perturbaciones escalonadas de resa y, Pirayú y Ypucu. Steviana, Vol. 6, 2104, pp.80 – 101 Recibido 1 julio 2014; aceptado 10 noviembre 2014 Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai rumbo Noreste-Suroeste, abarca un área de mente hace pensar en la existencia de una aproximadamente 880 km2 y sirve de medio corriente constante parecida a la de un río; es de transporte para los desagües de las comu- decir, es posible que en un principio existiera nidades, industrias y el material alóctono de la continuidad entre la entrada y la salida, como un río con todos sus elementos (González Según Josse et al (2007), los ecosistemas acuáticos como cualquier otro tipo de ecosis- Numerosos son los estudios llevados a ca- tema, son vulnerables a las acciones antro- bo en el área de influencia del lago, en espe- pogénicas. De acuerdo a esto el Convenio de cial lo referente a la vegetación, en este senti- Diversidad Biológica (CDB), sugiere que el do se mencionan los trabajos realizados por el enfoque ecosistémico es el que se debe utili- Instituto de Ciencias Básicas-Universidad zar para la planificación, la conservación y el Nacional de Asunción (1985), donde se citan uso sostenible de los recursos naturales; el algunas especies vegetales propias de la zona. mismo autor refiere, que es importante aportar Por su parte Mereles, (1991), describe las el conocimiento de la cobertura vegetal natu- unidades de vegetación existentes en la zona, ral actual y potencial, para facilitar de esta en la que menciona el bosque en galería, ma- forma procesos de restauración ecológica y torrales, praderas y sabanas hidromórficas con una interpretación adecuada sobre la potencia- sus correspondientes elementos. Más adelante, lidad natural vegetal de cada territorio; Recalde et al (1991, 1993), hace referencia a además, menciona la importancia de imple- los siguientes tipos de vegetación encontrados mentar programas de monitoreo y evaluación en la Cuenca alta del Rio Salado: Panicetum, de la integridad ecológica. Crysophylletum, Ipomoetum, además de Ce- Por su parte, Altieri & Nicholls (2000) dreletum, Celtetum y Acacetum; el mismo manifiestan que el manejo ecosistémico de un autor hace referencia a formaciones de sabana sitio vulnerable es el que mejor resultado arbolada, bosque alto residual, bosque resi- aporta, en especial cuando se trata de ecosis- dual de altura media, bosque ribereño y mato- temas frágiles. En todo ecosistema se dan una rral periódicamente inundable encontrados en variedad de procesos de renovación y servi- cios ecológicos; cuando estos se pierden, los Según el Instituto de Ciencias Básicas- costos pueden ser significativos (Altieri & Universidad Nacional de Asunción (1985), Nicholls, 2000), tal es la situación observada para el lago Ypacarai, la clasificación de la- en el Lago Ypacarai, donde los procesos go, laguna o río, se refiere a un ecosistema ecológicos naturales, se vieron interrumpidos acuático abierto (río) o cerrado (lago, laguna). por factores externos como la degradación de El mismo autor refiere que el Lago Ypacarai la cobertura vegetal, el incremento de la con- es un ecosistema abierto porque tiene entrada taminación y otros factores antropogénicos (Yapipú) y salida (Río Salado); por eso tiene son como la ganaderia y la agricultura en pe- la característica de un río; además menciona queña escala que son una constante en la zona que tiene las propiedades de un ecosistema del Lago Ypacaraí. En el lago existe una des- cerrado (laguna; poca profundidad y muy embocadura por donde los Arroyos Pirayú, poca corriente). Finalmente este autor expresa Yagua Resa-ú, Ypucú y otros pequeños cursos que este ecosistema posee dos características aportan sus aguas al lago Ypacarai, y luego combinadas, como un híbrido, que permite éste desagua por el Rio Salado, hacia el rio deducir de que el Lago Ypacarai no es lago, Paraguay, con una velocidad que indudable- según la clasificación limnológica, sino más Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai bien un embalse natural con características de MATERIALES Y MÉTODOS
La vegetación es uno de los elementos más Selección de sitios de estudio relevantes de la mayoría de los ecosistemas, es el sustento de la cadena trófica para mante- El sitio de estudio, abarca las unidades de ner el equilibrio de los mismos; en este senti- vegetación que se encuentran en la ribera del do las comunidades vegetales de las cuencas Río Salado y del Arroyo Pirayú y otros cauces adyacentes al Lago Ypacaraí, ya sea afluente hídricos de la cuenca del lago Ypacarai. Fue- o efluente han tenido una cobertura vegetal ron localizados puntos de muestreo a lo largo que mantenía el equilibrio de este sistema, de lo que actualmente solo existen remanentes de Las comunidades muestreadas fueron los comunidades vegetales. bosques en galería, bosques ribereños, saba- El objetivo de este trabajo fue evaluar el nas palmares de Copernicia alba y comunida- estado actual de los remanentes de comunida- des acuáticas, que son los que aún permane- des vegetales existentes, y que la información cen. Para los fines de este trabajo se define al generada pueda ser utilizada, en los delinea- bosque ribereño como aquellas comunidades mientos que se realizaren en el futuro, así bióticas y el ambiente en orillas de quebradas como para la toma de decisiones en la o caños, ríos, lagunas, lagos y algunos hume- búsqueda de soluciones a los problemas socio- dales según Naiman et al (2005), en Diaz P. et ambientales generados en torno al lago. La al (2010); bosques en galería son las unidades vegetación en la zona es un área que precisa de vegetación que se desarrollan bajo la in- de la restauración de sus componentes, de fluencia de los cursos de agua. manera que ésta pueda ser una de las solucio- Las coordenadas de los ocho puntos de nes que coadyuven a la recuperación del Lago muestreo se mencionan en la Tabla 1. La loca- lización en el mapa de los puntos de muestreo El conocimiento sobre la diversidad florís- se observa en la Fig. 1. tica aun existente facilitará el mejoramiento de las condiciones ecológicas del sistema, de la cual el hombre es el principal beneficiario, ya que conociendo sus elementos será posible la restauración o la conservación sustentable. La identificación y el análisis de los rema- nentes de comunidades naturales en las cuen- cas del Rio Salado y el Arroyo Pirayu, en la zona de influencia del Lago Ypacarai, propor- cionará informaciones valiosas para la toma de decisiones en los procesos de restauración a llevarse a cabo en la zona. Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai Tabla 1. Unidades de Vegetación y coordenadas de los sitios de muestreo
Unidades de Vegetación
Nombres de sitios
Coordenadas
Bosque en galería de altura media Parcela Arroyo Pirayú 1 25º23'22''S 57º16'5,8''WO Parcela Arroyo Pirayú 2 25º23'12,2''S 57º16'11,2''WO Sabana palmar de Copernicia alba Parcela Palmar 1 25º12'25''S 57º22'48,5''WO Parcela Palmar 2 25º12'29,2''S 57º24'48''WO Bosque alto en galería Parcela Río Salado 1 25º14'19,5''S 57º19'56,7''WO Bosque en galería de altura media Parcela Río Salado 2 25º14'45,9''S 57º19'41,7''WO Bosque ribereño de altura media Parcela Patiño 1 25º20'6,5''S 57º20'28,3''WO Bosque alto ribereño Parcela Patiño 2 25º20'0,8''S 57º20'30,1WO Figura 1. Mapa de localización de los puntos de muestreo Diseño de muestreo Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai Las Parcelas fueron de 2 x 50 m, siguien- La abundancia absoluta es el nº de indivi- do la metodología propuesta por Gentry duos por especie con respecto al nº total de (1986) en Sayre et al (2000). Se consideraron individuos encontrados en el área de estudio. para el muestreo a las Angiospermas. La abundancia relativa es la proporción de individuos de cada especie en el total de los Colectas, procesamiento de material de her- individuos del área (Lamprecht, 1990) bario y determinación taxonómica Abundancia relativa (Ab %)= ni/N x 100 ni=número de individuos de la iésima especie Se colectaron y procesaron todas las espe- N=número de individuos totales en la muestra cies encontradas fértiles (con flor y/o fruto). Las muestras fueron depositadas en el Herba- Dominancia: rio FACEN del Laboratorio de Análisis de Recursos Vegetales. Se registró además las Es el grado de cobertura de las especies o especies estériles in situ. del espacio ocupado por ellas Se determina Se identificaron las especies en el campo y como la suma de las proyecciones horizonta- las que no fueron identificadas en los sitios de les de las copas de los árboles en el suelo. colecta han sido determinadas a través de Debido a que la estructura vertical de los bos- claves de identificación taxonómica y compa- ques naturales tropicales y sub tropicales es ración de las muestras colectadas con material compleja, para la determinación de las pro- de herbario. Las identificaciones y las nomen- yecciones de las copas de los árboles se utiliza claturas fueron corroboradas en Tropicos las áreas básales, debido a que existe una co- (2013), Flora del Conosur (2013) y Flora de rrelación lineal alta entre el diámetro de la copa y el fuste (Lamprecht, 1990). Se elaboró el listado de especies presentes Es la sumatoria de las áreas basales de los en las comunidades con los siguientes datos individuos de una especie sobre un área dada. para cada una: Familia botánica, nombre científico, nombre común, hábito, usos, hábi- Dominancia absoluta = La suma de las Áreas tat y referencia. basales de los individuos de una especie/La suma de las Áreas basales de todas las espe- Caracterización cuantitativa de la comunidad y análisis de datos Dominancia relativa = (Dominancia absoluta de una especie/Dominancia absoluta de todas Se describieron y caracterizaron las comu- las especies) x 100 nidades vegetales teniendo en cuenta la fiso- nomía de las mismas, se determinó la abun- Índice de valor de Importancia Familiar: dancia, la dominancia y el Índice de valor de Importancia Familiar. Se elaboró una lista de los individuos in- Abundancia: ventariados para cada categoría con su densi- dad promedio. Para los individuos con DAP > Es el número de individuos por área y por 2,5 cm se calculó la abundancia y el Índice de especie en relación con el número total de Valor de Importancia Familiar (IVIF) según Mori et al (1983), usando el software EXCEL, citado en Díaz P. et al (2010) mediante la siguiente fórmula: Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai IVIFi = ΣDvRFi + DRFi IVIFi = Índice de Valor de Importancia Fami- Bosque en galería de altura media (Parce- la Arroyo Pirayú 1) DvRFi (Diversidad Relativa Familiar) = (N° de especies de la familia i/N° de especies tota- En este tipo de bosque con una altura pro- medio de 10 m, las especies que predominan DRFi (Densidad Relativa Familiar) = (N° de son aquellas resistentes a inundaciones perió- individuos de la familia i/N° de individuos dicas, que caracterizan al área; en ella se men- cionan Actinostemon concolor, con una abun- dancia relativa del 58% en la parcela y domi- nancia relativa de 42%, seguido en orden de importancia por Terminalia sp con una abun- RESULTADOS
dancia y dominancia relativa de 10,26 % y 10,82 % respectivamente. Tabla 3 Listado florístico Las que presentan un mayor Valor de Índi- ce de importancia familiar son: Euphorbiace- Del relevamiento florístico realizado, se ae, Combretaceae, Annonaceae. Tabla 4. registró que un total de 100 especies, de las cuales el 49% pertenecen al bosque, 42 % Bosque en galería de altura media (Parce- pertenecen al humedal y el 8% al palmar de la Arroyo Pirayú 2) Copernicia alba. En la Tabla 2 del Anexo A se registran el listado de familias, especies, Bosque de 15 m, con predominancia de nombre común, hábito, hábitat y material de Actinostemon concolor y Terminalia sp, se- referencia. guido de Acrocomia aculeata, Eugenia sp, Guarea sp, Peltophorum dubium, Sorocea Clasificación de las unidades de vegetación saxícola y Terminalia triflora. Las dos espe- cies más abundantes, Actinostemosn concolor Las figuras de las diferentes comunidades y Terminalia sp tienen 57,89 % y 10,53% se encuentran en el Anexo B. respectivamente, presentan además, valores de Las unidades muestreadas, corresponden a dominancia relativa mayores en referencia a Bosque en galería de altura media, Fig. 2 y 3 las otras especies, 51,518 % y 20,408 % res- (Parcela Arroyo Pirayú 1, Parcela Arroyo pectivamente. Tabla 5 Pirayú 2); Sabana palmar de Copernicia alba, Las dos parcelas relevadas a orillas del Fig. 4 (Parcela Palmar 1, Palmar 2); Bosque cauce del Arroyo Pirayú corresponden a la alto en galería, Fig. 5 (Parcela Río Salado 1); misma comunidad, se observó que en ambas Bosque en galería de altura media, Fig. 6 parcelas predominan individuos pertenecien- (Parcela Río Salado 2); Bosque ribereño de tes a la especie Actinostemon concolor, lo que altura media, Fig. 7 (Parcela Patiño 1); Bos- ha dado como resultado, que las mismas ten- que alto ribereño, Fig. 8 (Parcela Patiño 2). gan el Índice de Valor de Importancia Fami- liar similares. El mayor Índice de Valor de Caracterización de las comunidades rema- Importancia Familiar (IVIF) corresponde a las familias Euphorbiaceae y Combretaceae. La caracterización cuantitativa de las co- munidades se menciona en el Anexo C. Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai Sabana palmar de Copernicia alba (Par- cela Palmar 1, Palmar 2) Bosque en galería de altura media (Parce- la Río Salado 2) Tanto la parcela del palmar 1 y 2, corres- ponden a una misma formación, constituye la En esta formación de 15 m de altura, se ha comunidad de sabana palmar de Copernicia registrado la predominancia de Ocotea dyos- alba homogénea, sin la presencia de otras pirifolia, Guarea kunthziana y Eugenia sp, especies arbóreas, con un tapiz graminoso con otras especies acompañantes como Chry- muy denso en toda su extensión, compartien- sophyllum marginatum, Guarea sp. y Rollinia do con especies arbustivas de Acacia aroma y emarginata entre otras. La abundancia relativa Sesbania sp; en las que medran otras especies de las especies citadas son 22,73%; 18,18% y herbáceas tales como: Paspalum rufum, Oxa- 13, 64% respectivamente. Se observa lis sp, Cyperus sp, Euphorbia repens, Planta- además, entre los individuos más escasamente go major, Phyllantus sp. Tabla 7 y 9. representadas a Achatocarpus praecox, Cas- En estas dos parcelas, la familia Arecaceae searia sylvestris, Celtis ehrenbergiana y presenta el Indice de Valor de Importancia Chloroleucon tenuiflorum. Las especies con Familiar equivalente a 200. Tabla 8 y 10. mayor dominancia relativa son: Ocotea dios- La parcela Palmar 1, es una población que pyrifolia y Chloroleucon tenuiflorum con está constituida por individuos cuya altura va 60,06% y 26,58%. Tabla 13 hasta 14 m, mientras que la parcela Palmar 2 Las familias con mayor Índice de Valor de está representada por una población compues- Importancia Familiar son: Meliaceae, Laura- ta de individuos más jóvenes, cuyas alturas ceae y Myrtaceae. Tabla 14 llegan hasta los 5 m. Bosque ribereño de altura media (Parcela Bosque alto en galería (Parcela Río Sala- Patiño 1) En esta formación, se han registrado altu- Bosque con altura que va hasta los 25 m, ras que llegan hasta los 18 m, donde predomi- en el que predominan especies tales como nan Plinia rivularis, Achatocarpus sp y Oco- Seguiera paraguariensis, Achatocarpus prae- tea sp, con abundancias relativas de: 22,73% cox, Albizia niopoides y Cassearia sylvestris, para la primera y 18,18% para las otras dos. que son las de mayor abundancia relativa, Sin embargo, las de mayor dominancia relati- 15,79% para el primero y 10,53% para las va son en el orden siguiente: Achatocarpus sp, otras tres especies mencionadas. Es importan- Ocotea sp y Plinia rivularis con 23,02%; te señalar, que las especies de mayor domi- 18,19% y 14,07% respectivamente. Son espe- nancia relativa son las siguientes: Chloroleu- cies acompañantes de este grupo: Acrocomia con tenuiflorum, Seguiera paraguariensis, aculeata, Chrysophyllum marginatum y Ta- Albizia niopoides y Acrocomia aculeata, con bernaemontana catharinensis, entre otras 39,16%; 25,10%;17,46% y 7,93% respecti- especies menos relevantes. Tabla 15. vamente. Tabla 11. El grupo con mayor Índice de Valor de Las que poseen un mayor Índice de Valor Importancia Familiar es la Myrtaceae, ésta de Importancia Familiar son: Fabaceae, Phy- familia se caracteriza por formar comunidades tolacaceae, Achatocarpaceae y Flacourtiaceae. casi puras en regiones sub tropicales, de bos- ques de altura media. Tabla 16 Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai Bosque alto ribereño (Parcela Patiño 2) ra), pirizales, formación en la que predominan individuos de Cyperus giganteus (piri guasú) Es la comunidad arbórea más alta entre to- y peguajosales, en los que la especie dominan- das las evaluadas, donde predominan especies te es Thalia geniculata (peguajó), acompaña- tales como: Plinia rivularis y Achatocarpus da de poaceas y cyperaceas acuáticas, for- praecox, con abundancias relativas de 40,74% mando densas poblaciones. y 11,11%; acompañado de Eugenia sp, Se- Además se mencionan las asociaciones guiera paraguariensis y Sideroxylon obtusifo- frecuentes desarrolladas sobre suelos arenosos lium, entre otras de menor abundancia. Cabe inundables, que en general se ubican en las resaltar que Plinia rivularis, Albizia niopoides riberas inundables de cursos de agua y lagu- y Handroanthus heptaphyllus son especies nas; las especies más frecuentemente obser- con mayor dominancia: con 16,49% para la vadas fueron: Erythrina crista-galli (ceibo) y primera y 16,17% para las dos especies si- Sapium haematospermum (kurupika'y). guientes. Tabla 17 Otras especies observadas que se pueden El Índice de Valor de Importancia Familiar mencionar son: Polygonum punctatum (ka'a dió un valor de 64,81% para la Familia Myr- tai), Polygonum hispidum (ka'a tai guasu), taceae. Tabla 18 ambas hierbas medicinales utilizadas en la medicina popular, Cyperus giganteus (piri Vegetación acuática (a lo largo del Río guasú), Pontederia cordata, Hydrocotyle ra- nunculoides, Rhabdadenia madida, Pistia stratiotes, Eleocharis montana, Cissus palma- Los humedales son ecosistemas sumamen- ta, Cayaponia bonariensi, Mikania cordifolia; te dinámicos, caracterizados por la presencia arbustos Sesbania virgata, Ipomoea carnea, de agua y con límites difíciles de definir (Me- Byttneria scabra, Solanum glaucophyllum, Mimosa pellita, Hibiscus striatus, además de La caracterización de estas formaciones algunos árboles aislados de las especies Sa- vegetales está en función a las características pium haematospermum (kurupika'y) y Eryth- de los ambientes acuáticos en los cuales se rina crista-galli (ceibo), Acrocomia aculeata desarrollan. Entre estos se distinguen básica- (mbocajá); entre otras especies. Fig. 9, 10, 11 mente, dos grandes grupos: los ambientes acuáticos, los ambientes palustres o inunda- bles (Mereles, 2004) DISCUSIÓN
Los humedales de los ambientes acuáticos, son la formación vegetal predominante en los Los resultados obtenidos, nos permiten puntos de muestreo, se caracteriza por la clasificar las unidades de vegetación en cuatro abundancia de plantas acuáticas y palustres, tipos bien diferenciados: los bosques ribere- entre ellas Eichhornia crassipes (camalote), ños, los bosques en galería, las sabanas pal- especie sudamericana distribuida por las re- mares y la vegetación acuática. A continua- giones subtropicales y tropicales del mundo. ción se describen cada una de ellas: De acuerdo a la dominancia de las especies observadas se diferenciaron las siguientes Bosques en galería tipos de asociaciones vegetales, entre ellas: los totorales, formación vegetal en la que pre- Son los que acompañan el curso de agua y dominan individuos del género Typha (toto- dependen directamente del mismo, se desarro- Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai llan sobre los márgenes, y pueden estar sujetas (peguajosales) acompañadas de poaceas y a inundaciones periódicas; presentan 2 estra- cyperaceas acuáticas, formando densas pobla- tos de vegetación. En los márgenes del arroyo ciones. Además se observaron asociaciones de Pirayú el dosel superior va desde los 8 hasta Erythrina crista-galli (ceibo) y Sapium hae- 15m de altura y el estrato inferior va desde 1,7 matospermum (kurupika'y), especies que se hasta 7m. de altura; mientras que en las parce- ubican en las riberas inundables de cursos de las del Río Salado, se observa que el estrato superior va de 12 a 25m y el inferior desde 3 a De acuerdo a Mereles (2004), las unidades mencionadas en los párrafos anteriores se engloban dentro de los ecosistemas denomi- Bosques ribereños nados Humedales, cuyos límites son difíciles de definir. Sin embargo, considerando princi- Son los que se desarrollan influenciados palmente los elementos florísticos registrados por el agua, es decir bosques de tierra firme se propone considerarlos como unidades de que llegan hasta los márgenes de los cursos de vegetación diferentes. agua, pueden estar sujetos a inundaciones En el estudio de la composición florística, periódicas. En este caso se observa este tipo se registraron 100 especies vegetales, pertene- de bosques en los bordes del lago Ypacarai, ciendo el 49% de las especies registradas al que por los elementos registrados como: Han- bosque, 42% al humedal y el 8% al palmar. droanthus heptaphyllus, Peltophorum dubium El análisis de la estructura horizontal de las y Copaifera langsdorffii, se lo define como parcelas estudiadas, pone de manifiesto que Bosque ribereño. Se distinguen en ellos, 3 para los bosques de galería de las cuencas del estratos, el estrato alto de 20 a 33 m., el in- lago Ypacarai, las familias con mayor número termedio de 10 a 20 m y el estrato bajo de 2 a de especies son: Euphorbiaceae y Combreta- ceae, para los Bosques en galería del Arroyo Pirayú, Lauraceae, Meliaceae, Fabaceae y Sabanas palmares de Copernicia alba (ka- Phytolaccaceae para los Bosques en galería del Río Salado. Para los bosques ribereños del lago, las Son unidades de vegetación en las que el suelo está cubierto por vegetación herbácea Achatocarpaceae, Sapotaceae. dominante, acompañada de algunas especies En cuanto a las parcelas instaladas en la arbustivas y un estrato superior constituido formación sabana palmar de Copernicia alba, homogéneamente por poblaciones de palmas se observa que en la parcela 1, la población de Copernicia alba, que van desde una altura está constituida por individuos de hasta 14 m, mientras que la parcela 2, la población está compuesta de individuos más jóvenes de hasta Vegetación acuática Es relevante mencionar, que la vegetación Se observó la predominancia de comuni- ribereña es de suma importancia en el mante- dades de especies acuáticas entre las que se nimiento del equilibrio de los ecosistemas de mencionan a: Eichhornia crassipes y E. azu- las cuencas, por lo que la restauración es un rea (camalotales), Typha spp (totorales), Cy- camino posible para la recuperación de los perus giganteus (pirizales), Thalia geniculata hábitats degradados; en este sentido la Ley Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai 3239/07, expresa en el artículo 23 que "las Comparando los resultados obtenidos por márgenes bajo dominio privado adyacentes a Recalde et al (1993) en la cuenca del Río Sa- los cauces hídricos estarán sujetas, en toda su lado, se observa que las comunidades bosco- extensión, a las siguientes restricciones: sas identificadas en ese entonces albergaban b) Una zona de protección de fuentes de en su composición especies como: Cedrela agua de un ancho de cien metros a ambas fissilis, Gleditsia amorphoides, Cordia ameri- márgenes, en la que se condicionará el uso del cana, Syagrus romanzoffiana, Tabebuia nodo- suelo y las actividades que allí se realicen, sa, ausentes en el relevamiento realizado en conforme a lo que establezcan las normas jurídicas ambientales. La zona de policía no En el trabajo realizado por Mereles et al incluirá a la zona de uso público y estará ad- (1991), se mencionan especies como: Entero- yacente a ésta. lobium contortisiliquum, Apuleia leiocarpa, c) A los efectos del inciso "b", los propie- Cordia trichotoma, Calycophyllum multiflo- tarios ribereños cuyos inmuebles hubieran rum, Protium heptaphyllum, Cedrela fissilis, tenido o hubieran debido tener bosques pro- Maclura tinctoria, Dyatenopteryx sorbifolia, tectores deberán restablecerlos o reforestar la Cordia americana, Gleditsia amorphoides. superficie necesaria para recuperarlos y con- Las citadas especies no fueron encontradas en el relevamiento realizado. El Rio Salado es un efluente importante Los matorrales citados por Mereles et al del Lago Ypacarai, por lo que se considera (1991), ya no han sido localizados en los si- como un factor de relevancia dentro del eco- tios muestreados en zonas aledañas a la cuen- sistema acuático, tanto el efluente como los ca del lago Ypacarai, del Río Salado y del afluentes entre ellos el Arroyo Pirayú, deben arroyo Pirayú. La ausencia de las especies y la de tener la cubierta vegetal necesaria para formación vegetal citada anteriormente, podr- cumplir adecuadamente con el rol dentro de la ían deberse a la degradación y/o extracción a comunidad natural; tanto en los márgenes del los que son sometidos los ecosistemas que Rio Salado así como en los márgenes del rodean a la cuenca del lago. Arroyo Pirayú, en ambos casos solo quedan algunas muestras de comunidades vegetales que forman la cobertura de las cuencas de ambos cursos de agua. Cabe acotar, que el Se clasificaron las unidades de vegetación Lago Ypacaraí se encuentra en un estado de en cuatro tipos bien diferenciados: los bosques fuerte contaminación por las actividades an- ribereños, los bosques en galería, las sabanas tropogénicas, uno de las causantes de ese es- palmares y vegetación acuática. tado es la degradación de los ecosistemas En el estudio de la composición florística, naturales que impactan sobre el mismo, entre se registraron 100 especies, perteneciendo el ellos la degradación de la vegetación de los 49% de las especies registradas al bosque, afluentes y del efluente. 42% al humedal y el 8% al palmar. En trabajos de investigación anteriores se Se observó la ausencia de ciertas especies han identificado 105 especies (Recalde de maderables, tales como: Apuleia leiocarpa, Bordón et al, 1991), en contraste con las 100 Cordia trichotoma, Calycophyllum multiflo- especies registradas en este estudio, muchas rum, Cedrela fissilis, Dyatenopteryx sorbifo- de ellas son similares a las registradas en este lia, Cordia americana, entre otras especies de menor importancia, que fueron encontradas en Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai la década de los años 90, la ausencia de estas ración de la cuenca del lago Ypacarai a nivel especies en los registros actuales podrían de- país, además de la necesidad imperiosa del berse a la degradación y/o extracción a los que cumplimiento de las normativas ambientales son sometidos los ecosistemas que rodean a la por parte de los actores sociales afectados. cuenca del lago. Ésta restauración se podría realizar con los Las especies con mayor abundancia y do- dueños de las propiedades que aun conserven minancia para la Parcela de Pirayu 1 y Pirayu remanentes de unidades de vegetación origi- 2 son: Actinostemon concolor y Terminalia sp nales, en especial los bosques de ribera, bos- Se observó además en las parcelas Palmar ques en galería y sabana palmar de Coperni- 1 y 2 poblaciones puras de Copernicia alba. cia alba. Al mismo tiempo es necesario in- En la Parcela Rio Salado 1, predominan en corporar un plan de ordenamiento ambiental, abundancia Seguiera paraguariensis, Achato- con un fuerte componente de concienciación, carpus praecox, Albizia niopoides y Cassea- para facilitar la participación de los actores ria sylvestris; y las de mayor dominancia son: sociales involucrados. Chloroleucon tenuiflorum, Seguiera paragua- riensis, Albizia niopoides y Acrocomia acu- leata. Mientras que en la Parcela Rio Salado 2, son de mayor abundancia Ocotea dyospiri- Los autores agradecen al Rectorado de la folia, Guarea kunthziana y Eugenia sp y las UNA por los fondos proveídos para el desa- de mayor dominancia: Ocotea diospyrifolia y rrollo del proyecto; a los integrantes del grupo Chloroleucon tenuiflorum. ecológico "taguató" de San Bernardino por la En la Parcela Patiño 1, las de mayor abun- ayuda en los muestreos de ambientes acuáti- dancia son: Plinia rivularis, Achatocarpus sp y Ocotea sp, en tanto que las de mayor domi- nancia son Achatocarpus sp, Ocotea sp y Pli- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
nia rivularis. En la Parcela Patiño 2, las más abundantes son: Plinia rivularis y Achato- Altieri, M. et Nicholls. (2000). Agroecolog- carpus praecox; mientras que, Plinia rivula- ía-Teoría y práctica para una agricultura ris, Albizia niopoides y Handroanthus hep- sustentable. Serie textos básicos para la taphyllus son las especies con mayor domi- formación ambiental. Programa de las Na- ciones Unidas para el Medio Ambiente. En cuanto a los Valores de Índice de Im- Red de Formación Ambiental para Améri- portancia Familiar para cada parcela evaluada ca Latina y el Caribe. México. 250 pp. son: Euphorbiaceae, Combretaceae, Annona- Alvis G., J. F. 2009. Análisis estructural de un ceae en Parcela Pirayu 1, Euphorbiaceae y bosque natural localizado en zona rural del Combretaceae en Parcela Pirayu 2, Fabaceae, Municipio de Popayan. Facultad de Cien- Phytolacaceae, Achatocarpaceae y Flacourtia- cias Agropecuarias, Vol 7, 1: 115-122 ceae en Parcela rio Salado 1, Meliaceae, Lau- Díaz p. et al. 2010. Composición florística raceae y Myrtaceae en Parcela Rio Salado 2, del bosque ribereño del Río San José, Re- Myrtaceae en Parcela Patiño 1 y Patiño 2. serva Forestal de Imataca, Estado Bolivar, La única alternativa para recuperar y/o Venezuela. Acta Bot. Venez. 33 (1): 1-21. conservar los ecosistemas es iniciar los proce- sos de restauración de los mismos, a través de la implementación de un programa de recupe- Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai aArgentina/FA.asp. Fecha de consulta: 2, Salado. Informe Final. San Lorenzo, Para- 3, 4, 5 de diciembre del 2013. Flora del Paraguay. L. Ramella & P. Perret Recalde de Bordón et al. 1993. Relevamiento (editores). Conservatoire et Jardin Botani- de la vegetación alta de la sub cuenca del ques de la Ville de Geneve. Rio Salado. Informe Final. San Lorenzo, González Romero, N. 1980. Clasificación Paraguay. 19 pp. Tecnico-Cientifica del Sistema "Lago Ritterbusch, B. 1988. Estudio Limnológico Ypacarai". Investigación FACEN nª 17. del Lago Ypacarai. Revista de la Asocia- Instituto de Ciencias Básicas-Universidad ción de Ciencias Naturales del Litoral, 19 Nacional de Asunción. 1985. Informe Técnico. Estudio Limnologico del Lago Sayre, R., E. Roca, G. Sedaghatkish, B. Ypacarai. 198 pp. Young y S. Keel. 2000. Un Enfoque en la Josse, C. et al. 2007. Sistemas Ecológicos de la Cuenca Amazónica de Perú y Bolivia- Rápidas. The Nature Conservancy. Edi- Clasificación y mapeo. NatureServe. Ar- ción en Español. Alright, Virginia. 196 lington, Virginia, EE UU . 92 pp. Lamprecht, H. 1990. Silvicultura en los trópi- TROPICOS. 2013. En: cos. GTZ. República Federal Alemana. Fecha de consulta: 3, 4 y 5 de diciembre Ley N°3239/2007 de los Recursos Hídricos Fecha de consulta: 8 de marzo del 2013. Mereles, F. 2004. Los humedales del Para- guay: principales tipos de vegetación. IN: Salas, D. Mereles, F. & A. Yanosky (eds.), Humedales del Paraguay. Convención RAMSAR, Fundación Moisés Bertoni, Comité Nacional de Humedales, Proyecto WWF/01/PAR2. Departamento de Estado y Servicio de Pesca y Vida Silvestre de los Estados Unidos de América. 67-88 pp. Mereles, F. et al. 1991. Contribución al estu- dio de la vegetación del valle del Lago de Ypacarai II. Revista. Universidad Nacio-nal de Asunción. Año 2- Número 2. 56-59 pp. Mori, S. A., B. M. Boom, A. M. de Carvalho and T. S. Dos Santos. 1983. Ecological importance of Myrtaceae in an eastern Brazilian wet forest forest. Biotropica 15: 68-70 Recalde de Bordón et al. 1991. Relevamiento preliminar de la flora de la Cuenca del Rio Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pi- rayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai Anexo A. Tabla 2. Familia, Genero y especie, Nombre común, Hábito, Usos, Hábitat, Referencia

Nombre Científico
N. Común
Hábitat
Referencia
Achatocarpus praecox Griseb. var. praecox Achatocarpus sp. Sagittaria montevidensis Cham. & Schltdl. ssp. montevidensis Gomphrena sp. Pfaffia sp. Rollinia emarginata Schltdl. Eryngium ebracteatum Lam. Hydrocotyle ranunculoides L. f. Hydrocotyle sp. Rhabdadenia madida (Vell.) Miers Tabernaemontana catharinensis A. DC. Pistia stratiotes L. repollito de agua h acuática Acrocomia aculeata (Jacq.) Lodd. ex Mart. Copernicia alba Morong Mikania sp. Vernonia sp. Dolichandra cynanchoides Cham. Fridericia sp. (flores amarillas) Fridericia sp. (flores lilas) Handroanthus heptaphyllus (Vell.) Mattos Amphilophium crucigerum (L.) L.G. Lohmann Cordia glabrata A. DC. peterevy morotï árbol Pseudananas sagenarius (Arruda) Camargo Celtis ehrenbergiana (Klotzsch) Liebm. Ceratophyllaceae Ceratophyllum sp. Terminalia sp. Terminalia sp.2 Terminalia triflora (Griseb.) Lillo Commelina erecta L. Ipomoea carnea Jacq. ssp. fistulosa (Mart. ex Choisy) D.F.Austin Ipomoea sp Cayaponia bonariensis (Mill.) Mart.Crov. Cyperus giganteus Vahl Cyperus sp. Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pi- rayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai Eleocharis montana (Kunth) Roem. & Schult. Eleocharis sp. Actinostemon concolor (Spreng.) Müll. Arg. Sapium haematospermum Müll. Arg. Euphorbia sp. Acacia caven (Molina) Molina var. caven Albizia niopoides (Spruce ex Benth.) Burkart Chloroleucon tenuiflorum (Benth.) Barneby & J.W. Grimes Copaifera langsdorffii Desf. var. langsdorfii Erythrina crista-galli L. Inga uraguensis Hook. & Arn. Mimosa pigra L. var. pigra Peltophorum dubium (Spreng.) Taub. Senna occidentalis (L.) Link Sesbania virgata (Cav.) Pers. Ocotea diospyrifolia (Meisn.) Mez Ocotea sp. Heimia salicifolia (Kunth) Link Hibiscus striatus Cav. Thalia geniculata L. Guarea kunthiana A. Juss. Guarea sp. Trichilia pallida Sw. Sorocea sprucei (Baill.) J.F. Macbr. ssp. saxicola (Hassl.) C.C. Berg Eugenia pitanga (O. Berg) Kiaersk. Eugenia sp. Hexachlamys edulis (O. Berg) Kausel & D. Legrand Plinia rivularis (Cambess.) Rotman Ludwigia sp1. Ludwigia sp2. (flores pequeñas) Ludwigia sp3.(flores blancas) Campylocentrum neglectum (Rchb. f. & Warm.) Cogn. hierba epífita bosque Oxalis sp. Passiflora sp. Seguieria paraguayensis Morong Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pi- rayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai Plantago major L. Panicum sp. Paspalum rufum Nees ex Steud. Polygonum hispidum Kunth Polygonum punctatum Elliott Eichhornia azurea (Sw.) Kunth Eichhornia crassipes (Mart.) Solms Pontederia cordata L. var. cordata Portulaca sp. Prunus sp. Cephalanthus glabratus (Spreng.) K. Schum. Richardia sp. Helietta apiculata Benth. Zanthoxylum petiolare A. St.-Hil. & Tul. Zanthoxylum fagara (L.)Sarg. Casearia sylvestris Sw. var. sylvestris Xylosma venosa N.E. Br. Salvinia sp. Chrysophyllum marginatum (Hook. & Arn.) Radlk. ssp. marginatum pykasu rembi'u Sideroxylon obtusifolium (Roem. & Schult.) T.D. Penn. Smilax sp. Cestrum laevigatum Schltdl. Petunia integrifolia (Hook.) Schinz & Thell. ssp. integrifolia Solanum glaucophyllum Desf. Solanum sisymbriifolium Lam. Solanum sp. Byttneria scabra L. Luehea divaricata Mart. Typha sp. Cissus palmata Poir. Referencias: Enr: enredadera; h acuática: hierba acuática; MVera: María Vera; MEOC: material estéril observado en el campo Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai Anexo B. Figuras de los diferentes tipos de comunidades observadas en los sitios de muestreo. Figura 2. Bosque en galería de altura media Figura 3. Bosque en galería de altura media Figura 4. Sabana palmar de Copernicia alba Figura 5. Bosque alto en galería (Parcela Río Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai Figura 6. Bosque en galería de altura media (Par- Figura 7. Bosque ribereño de altura media (Parcela cela Río Salado 2) Figura 8. Bosque alto ribereño (Parcela Patiño 2) Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai Figura 9. Camalotales (Eichhornia crassipes y E. Figura 10. Camalotales (Eichhornia crassipes y E. azurea) azurea) y en el fondo totorales (Typha spp) Figura 11. Camalotales (Eichhornia azurea y E. Figura 12. Peguajósales (Thalia geniculata) crassipes), en el fondo Pirizales (Cyperus gigan- Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai Anexo C. Tabla 3. Familia, especies, Abundancia y dominancia absoluta y relativa. Bosque en galería de altura media (Parcela Arroyo Pirayú 1) Nº Familia
Actinostemon concolor Rollinia emarginata Terminalia triflora Celtis ehrenbergiana Sorocea sprucei ssp saxicola Terminalia sp. Inga uraguensis Tabernaemontana catharinensis Total general
Tabla 4. Familia, Índice de Valor de Importancia Familiar. Bosque en galería de altura media (Parcela Arroyo Pirayú 1) Nº de Ind x Fi
Nº de Sp. x Fi
Total general
Tabla 5. Familia, especies, Abundancia y dominancia absoluta y relativa. Bosque en galería de altura media (Parcela Arroyo Pirayú 2) Nº Familia
Actinostemon concolor Terminalia sp Acrocomia aculeata Eugenia sp Guarea sp Peltophorum dubium Sorocea sprucei ssp saxicola Terminalia triflora Total general
Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai Tabla 6. Familia, Índice de Valor de Importancia Familiar. Bosque en galería de altura media (Parcela Arroyo Pirayú
2)

Nº de Ind x Fi
Nº de Sp. x Fi

Tabla 7. Familia, especies, Abundancia y dominancia absoluta y relativa. Sabana palmar de Copernicia alba (Parcela
Palmar 1)

Copernicia alba
Tabla 8. Familia, Índice de Valor de Importancia Familiar. Sabana palmar de Copernicia alba (Parcela Palmar 1)

Familias
Nº de Ind x Fi
Nº de Sp. x Fi

Tabla 9. Familia, especies, Abundancia y dominancia absoluta y relativa. Sabana palmar de Copernicia alba (Parcela
Palmar 2)
Nº Familia
Copernicia alba
Tabla 10. Familia, Índice de Valor de Importancia Familiar. Sabana palmar de Copernicia alba (Parcela Palmar 2)

Familias
Nº de Ind x Fi
Nº de Sp. x Fi

Tabla 11. Familia, especies, Abundancia absoluta y relativa del Bosque alto en galería (Parcela Río Salado 1)
N° Familia
Seguieria paraguayensis Achatocarpus praecox var. praecox Albizia niopoides Cassearia sylvestris Acrocomia aculeata Chloroleucon tenuiflorum Eugenia sp. Prunus sp. Sapium haematospermum Tabernaemontana catharinensis Terminalia sp Trichilia pallida Zanthoxyllum petiolare Total general
Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai Tabla 12. Familia, Índice de Valor de Importancia Familiar. Bosque alto en galería (Parcela Río Salado 1)
Nº Familias
Nº de Ind x Fi
Nº de Sp. x Fi

Tabla 13. Familia, especies, Abundancia y dominancia absoluta y relativa. Bosque en galería de altura media (Parcela
Río Salado 2)
N° Familia
Ocotea diospyrifolia Guarea kunthziana Eugenia sp Chrysophyllum marginatum ssp marginatum Guarea sp Rollinia emarginata Achatocarpus praexox var praecox Cassearia sylvestris Celtis ehrenbergiana Chloroleucon tenuiflorum Total general

Tabla 14. Familia, Índice de Valor de Importancia Familiar. Bosque en galería de altura media (Parcela Río Salado 2)
Nº Familias
Nº de Ind x Fi
Nº de Sp. x Fi
Steviana, Vol. 6. 2014. Benítez et al. Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai Tabla 15. Familia, especies, Abundancia y Dominancia absoluta y relativa. Bosque ribereño de altura media (Parcela Patiño 1)
Nº Familia
Plinia rivularis Achatocarpus sp Ocotea sp Acrocomia aculeata Chrysophyllum marginatum ssp marginatum Tabernaemontana catharinensis Eugenia pitanga Hexaclamys edulis Zanthoxylum fagara Total general
Tabla 16. Familia, Índice de Valor de Importancia Familiar. Bosque ribereño de altura media (Parcela Patiño 1)

Familias
Nº de Ind x Fi
Nº de Sp. x Fi
Total general
Tabla 17. Familia, especies, Abundancia y Dominancia absoluta y relativa. Bosque alto ribereño (Parcela Patiño 2)
Nº Familia
Plinia rivularis Achatocarpus praecox var praecox Eugenia sp Seguieria paraguayensis Sideroxylon obtusifolium Albizia niopoides Chrysophyllum marginatum ssp marginatum Copaifera langsdorfii var langsdorfii Luehea divaricata Handroanthus heptaphyllus Total general
Tabla 18. Familia, Índice de Valor de Importancia Familiar. Bosque alto ribereño (Parcela Patiño 2)
Nº Familias
Nº de Ind x Fi
Nº de Sp. x Fi
Total general
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dos por su nombre, por una abreviación definida, o por el número arábigo en negrita (mientras el compuesto sea
nombrado consistentemente de una de estas tres formas). Siempre que sea posible, los autores deben referirse a los
compuestos químicos y las biomoléculas usando la nomenclatura sistemática, preferentemente utilizando IUPAC.
Materiales y Métodos
Los autores deben limitar la sección de Métodos a 1500 palabras y deben asegurarse de que su sección de Métodos incluya datos experimentales y de caracterización necesarios para que otros en el área reproduzcan su trab a-
jo. Las descripciones de protocolos estándar y procedimientos experimentales deben ser dadas. Los autores deben
describir el protocolo experimental en detalle, refiriéndose a las cantidades de los reactivos en paréntesis, cuando sea
posible (ej.: 1.03 g, 0.100 mmol). La masa aislada y el rendimiento porcentual deben ser reportados al final de cada
protocolo.
Pautas estadísticas
Cada artículo que contiene pruebas estadísticas debe especificar el nombre del test estadístico, el valor n para cada análisis estadístico, las comparaciones de interés, una justificación para el uso de ese test (incluyendo, por ejem-plo, una discusión de la normalidad de los datos cuando el test es apropiado sólo para datos normales), el nivel alfa para todos los tests, si los tests tuvieron una o dos colas, y el valor P real para cada test (no meramente "significativo" o "P < 0.05"). Debe ser claro qué test estadístico fue utilizado para generar cada valor P. El uso de la palabra "signifi-cativo" debe estar siempre acompañado de un valor P; de lo contrario, utilice "sustancial", "considerable", etc. Los conjuntos de datos deben ser resumidos con estadística descriptiva, la cual debe incluir el valor n para cada conjunto de datos, una medida de tendencia central claramente catalogada (como la media o la mediana), y una medi-
da de variabilidad claramente catalogada (como desviación estándar o rango). Los rangos son más apropiados que las
desviaciones estándar o errores estándar para conjuntos pequeños de datos. Los gráficos deben incluir barras de
error
claramente señaladas. Los autores deben declarar si un número que sigue a un signo ± es un error estándar
(SEM) o una desviación estándar (SD).
Caracterización de materiales químicos y biomoleculares
Los autores deben proveer datos adecuados para sostener su asignación de identidad y pureza para cada nuevo compuesto descripto en el manuscrito. Los autores deben proveer una declaración confirmando la fuente, identidad y
pureza de compuestos conocidos que sean centrales al estudio científico, incluso si son comprados o resintetizados
utilizando métodos publicados.
Referencias
Las referencias serán electrónicamente vinculadas a bases de datos externas cuando sea posible, lo que hace que la corrección del formato sea esencial. Sólo artículos que hayan sido publicados o aceptados por una publicación
identificada o un servidor de pre-impresiones reconocido deben incluirse; las pre-impresiones de artículos aceptados
en la lista de referencias deben ser presentadas con el manuscrito. Los resúmenes publicados de conferencias y las
patentes numeradas pueden incluirse en la lista de referencias. En cuanto a las referencias bibliográficas, todas las
publicaciones deberán seguir el estilo: Chicago Manual of Style (author-date). Ejemplos:
Libro:
NRC (National Research Council). 1996. Understanding risk: Informing decisions in a democratic society. Was- hington, D.C: National Academic Press. Sección de un libro:
Blancas, L, D. M Arias, y N. C Ellstrand. 2002. «Patterns of genetic diversity in sympatric and allopatric populations of maize and its wild relative teosinte in Mexico: Evidence for hybridization». En Scientific methods work-shop: Ecological and agronomic consequences of gene flow from transgenic crops to wild relatives, ed. A. A Snow, 31–38. Meeting Proceedings. Columbus, Ohio. Publicación en revistacientífica:
Chavez, Nancy, Jose Flores, Joseph Martin, Norman Ellstrand, Roberto Guadagnuolo, Sylvia Heredia, y Shana Welles. 2012. «Maize x Teosinte Hybrid Cobs Do Not Prevent Crop Gene Introgression». Economic Botany 66 (2): 132–137. doi:10.1007/s12231-012-9195-2. Wilkes, H. G. 1967. «Teosinte: The closest relative of maize». Ph.D. thesis, Cambridge, Massachusetts: Harvard Página web:
Kew Royal Botanic Gardens. 2011. «Kew Economic Botany Collection». Kew Royal Botanic Gardens. Pies de figura
Las tablas y figuras deberás ser numeradas secuencialmente en el texto. Los pies de figura comienzan con un breve título para toda la figura y continúan con una descripción breve de lo que se observa en cada panel en secuencia
y los símbolos usados. Cada leyenda debe totalizar no más de 350 palabras.
Tablas
Presente sus tablas al final de su documento de texto (en Word o TeX/LaTeX). Las tablas que incluyan análisis estadísticos de datos deben describir sus estándares de análisis de error y rangos en un pie de tabla.
Ecuaciones
Las ecuaciones y las expresiones matemáticas deben ser provistas en el texto principal del artículo. Las ecuacio- nes que son citadas en el texto se identifican con números entre paréntesis, tales como (1), y son citadas en el manu s-crito como "ecuación (1)". Si su manuscrito estará en formato .docx y contiene ecuaciones, debe asegurarse de que sus ecuaciones sean edi- tables cuando el archivo entre a producción.
Figuras para la publicación
Prepare figuras que quepan en una (87 mm de ancho) o dos columnas (180 mm de ancho). Los autores son res- ponsables de la obtención de permisos para la publicación de cualquier figura o ilustración que estén protegidas por
derechos de autor, incluyendo figuras publicadas en otros lugares y fotografías tomadas por fotógrafos profesionales.
La revista no puede publicar imágenes descargadas de internet sin los permisos correspondientes.
Gráficos, tablas y esquemas
Todos los gráficos y los esquemas deben ser proveídos en un formato vectorial, tal como EPS (preferido), y de- ben ser guardados o exportados como tales directamente desde la aplicación en la que fueron hechos. No deben ser
guardados como mapas de bits, jpegs u otros tipos de archivo no vectoriales a menos que sea estrictamente necesario.
Imágenes fotográficas y de mapas de bits
Todas las imágenes fotográficas y de mapas de bits deben ser enviadas en formato TIFF (preferido) o JPEG a 300 DPI de ser posible. No presente archivos de Word o PowerPoint con imágenes colocadas.
Estructuras químicas
Las estructuras químicas deben producirse con ChemDraw o un programa similar. A todos los compuestos quí-
micos se les debe asignar un número arábigo en negrita de acuerdo al orden en el que son presentados en el texto
manuscrito.
Políticas de presentación
La presentación a Steviana se interpreta como que el manuscrito no ha sido ya publicado en ninguna otra parte.
Si un trabajo similar o relacionado se ha publicado o presentado en algún otro lugar, los autores deben proveer una
copia con el artículo presentado. Los autores no pueden presentar el artículo en ningún otro lugar mientras esté puesto
a consideración en Steviana.
La afiliación primaria para cada autor debe ser la institución en donde ha hecho la mayor parte de su trabajo.
Si el autor se ha mudado posteriormente, la dirección actual también se puede mencionar. Steviana se reserva el derecho de rechazar un artículo incluso después de que haya sido aceptado si se vuelve
patente la existencia de serios problemas con el contenido científico o con violaciones de nuestras políticas de publi-
cación.
Revisión por pares
El trabajo será recepcionado por el Asistente de edición, quien remitirá a los miembros del Cuerpo Editorial. Los trabajos podrán ser revisados por uno o más miembros del Cuerpo editorial si lo creyere conveniente. El autor corre s-pondiente será notificado por email cuando un Miembro del Comité Científico decida si el artículo ha de ser revisado o no. En este momento el Miembro del Comité Científico tiene dos opciones: El Cuerpo Editorial puede elegir contactar a uno o más árbitro(s) no asociado(s) con Steviana para conducir la
revisión por pares.
El Cuerpo Editorial puede elegir conducir la revisión por pares, él mismo, o por los miembros del Comité científico si necesario fuere, a base de su propia experiencia y pericia. Luego de la consideración el Miembro del Comité Científico tomará una de las siguientes decisiones: Aceptar el artículo, con o sin revisiones editoriales. Invitar a los autores a revisar su manuscrito para dirigirse a inquietudes específicas antes de que sea tomada una decisión final. Rechazar el artículo, indicando a los autores que mayor trabajo podría justificar un nuevo intento de publica-ción. Rechazar el artículo por completo. Durante la etapa de presentación, los autores pueden indicar un número limitado de científicos que no deben re- visar el artículo. Los científicos excluidos deben ser identificados por su nombre. Los autores también pueden sugerir
potenciales revisores; estas sugerencias suelen ser de ayuda, aunque no siempre son seguidas. La identidad de los
árbitros no es revelada a los autores, excepto a solicitud de los árbitros.
Decisión post-revisión
En los casos en que los árbitros hayan solicitado cambios bien definidos al manuscrito que no parezcan requerir experimentación extensiva adicional, el Cuerpo Editorial puede solicitar un manuscrito revisado que responda a las inquietudes de los árbitros. La carta de decisión especificará un plazo, y las revisiones que sean devueltas dentro de este periodo retendrán la fecha original de su presentación. En los casos en que las inquietudes de los árbitros que tengan un mayor alcance, el Cuerpo Editorial normalmen- te rechazará el manuscrito. Si el Miembro delComité siente que el trabajo es de interés potencial para la revista, sin
embargo, podrá expresar interés en que el artículo vuelva a ser presentado.
Presentación final y aceptación
Cuando todas las recomendaciones editoriales se hayan resuelto, el artículo es finalmente aceptado. La fecha
de recepción es la fecha en la que los editores recibieron el manuscrito original (o si había sido previamente rechaza-
do, la fecha en la que recibieron el manuscrito por segunda vez). La fecha de aceptación es aquella en la que el Cuer-
po Editorial envía la carta de aceptación.
Selección de árbitros
La selección de árbitros es crítica para el proceso de revisión, y el Cuerpo Editorial debe basar su decisión en va- rios factores, incluyendo pericia, recomendaciones específicas, y experiencia previa.
Redacción de la revisión
Al redactar la revisión, los árbitros deben mantener en mente que están evaluando el manuscrito en términos de su solidez técnica. De manera a permitir decisiones rápidas y fáciles hemos desarrollado una plantilla de base técnica. El proceso de revisión responderá las siguientes preguntas: ¿Es el artículo técnicamente sólido? ¿Están las afirmaciones basadas en evidencias? Si no, ¿qué mayor evidencia es necesaria? ¿Son las afirmaciones totalmente respaldadas por los datos experimentales? ¿Las afirmaciones son apropiadamente discutidas en el contexto de la literatura previa? Si el manuscrito es inaceptable en su forma presente, ¿el estudio parece suficientemente prometedor como para que los autores sean alentados a considerar una segunda presentación en el futuro? Además de responder las preguntas anteriores, los árbitros pueden proveer mayor información, incluyendo co- mentarios que pueden contestar a lo siguiente: ¿Está el manuscrito claramente redactado? Si no, ¿cómo puede hacerse más accesible? ¿Se han hecho justicia los autores sin sobrevalorar sus afirmaciones? ¿Han sido justos en el tratamiento de la literatura previa? ¿Han proveído suficientes detalles metodológicos como para que el experimento pueda ser reproducido? ¿Es sólido el análisis estadístico de los datos? ¿Existe alguna preocupación ética especial con respecto al uso de sujetos humanos o animales? Solicitamos a todos los Miembros del Cuerpo Editorial y a los árbitros externos que traten el proceso de revi-
sión de manera estrictamente confidencial, y que no discutan el manuscrito con nadie no directamente involucrado
en la revisión.
Plazos
Pedimos a los árbitros que respondan con celeridad (dentro de una semana de haber recibido un manuscrito, aunque esto puede ser extendido o disminuido por acuerdo previo). Si los árbitros prevén un retraso mayor, les solici-tamos que notifiquen al Cuerpo Editorial de manera que podamos mantener a los autores informados y, cuando sea necesario, encontrar árbitros alternativos. Anonimato
No revelamos la identidad de los árbitros a los autores o a otros árbitros, excepto cuando los árbitros soliciten específicamente ser identificados.
Edición de los reportes de los árbitros
Como una cuestión de política, no suprimimos los reportes de los árbitros; cualquier comentario dirigido a los autores es transmitido, sin perjuicio de lo que nosotros pudiéramos pensar del contenido. Solicitamos a los árbitros
que eviten decir nada que pudiera causar ofensa innecesaria; en cambio, los autores deben reconocer que las críticas
no son necesariamente injustas simplemente porque estén expresadas en un lenguaje claro, conciso y directo.
Conflictos de intereses
Nuestra política es evitar Miembros del Cuerpo Editorial y árbitros que los autores hayan excluido, por cualquier razón. También tratamos de evitar a árbitros que tienen colaboraciones recientes o en curso con los autores, que
hayan comentado en borradores del manuscrito, que estén en directa competencia para publicar el mismo descubri-
miento, que sepamos que tienen una historia de disputa con los autores, o que tengan un interés financiero en el resul-
tado.
Información de contacto
Para preguntas editoriales generales relacionadas con Steviana, incluyendo consultas sobre la presentación de
manuscritos, y para consultas relacionadas con la guía para autores, por favor contacte con dfernandez@facen.una.py La Guía para los autores, in extenso, está disponible en la web: A partir del Vol. 7 los artículos remitidos deberán ser presentados rigurosamente en el formato de la re- vista y seguir exactamente la guía para autores. Steviana, Vol. 6, 2014
Formas de adquisición: Por canje e intercambio con instituciones oficiales y privadas Para canjes e intercambios dirigirse a: Bonifacia Benítez de Bertoni Laboratorio de Análisis de Recursos Vegetales-Herbario FACEN Dirección Postal: 1039 Facultad de Ciencias Exactas y Naturales-UNA Campus Universitario, San Lorenzo-Paraguay Steviana, Vol. 6, 2014
Páginas
Contenido
5 - 12 -Propiedad antichagasica in vitro e in vivo de maculina aislada de Helietta apiculata Benth. (Rutaceae) María Elena Ferreira, Hector Nakayama, Susana Torres, Gloria Yaluff, Luis Sana-bria, Ninfa Vera de Bilbao, Alicia Schinini, Antonieta Rojas de Arias, Isabelle Guy, Helene Guinaudeau, Alain Fournet 13 - 19 -Incidencia y distribución de hongos filamentosos durante el proceso de beneficio húmedo del café Andrea Alejandra Arrúa Alvarenga, Martha Yolanda Quezada Viay, Danilo Fernández Ríos, Ernesto Moreno Martínez, Alberto Flores Olivas 20 - 35 -Asociación in vitro del aceite esencial Eugenia caryophyllata Thunb. y anfotericina B sobre cepas de Candida tropicalis Juliana Moura Mendes Arrua, Fillipe de Oliveira Pereira, Felipe Queiroga Sarmen-to Guerra, Everardo Albuquerque Menezes, Francisco Afrânio Cunha, Edeltrudes Oliveira Lima 36 - 49 -Caracterización biológica del Arroyo San Lorenzo en el tramo del Campus Universitario-UNA Gilberto Antonio Benítez Rodas, Héctor David Nakayama, Juliana Moura Arrúa, Griselda Franco Cardozo, Rocío Rosmary Acosta Brítez, Liza María Ramírez Garay 50 - 69 -Caracterización físico-química del aceite esencial de Origanum syria- cum L. extraído a macro escala en distintos tiempos utilizando el método de destilación por arrastre de vapor Miguel Martínez, Claudia Mancuello, Claudia Pereira, Fidelina González, Bonifa-cia Benítez, Francisco Ferreira, César Sena 70 - 70 - El género Pleurotus (Pleurotaceae-Basidiomycota) en Paraguay Alma Flecha Rivas, Barbara De Madrignac, Michelle Campi 80 – 101 - Análisis de los remanentes de comunidades vegetales de las cuencas del Rio Salado y del Arroyo Pirayú, en el área de influencia del Lago Ypacarai Bonifacia Benítez, Maria Vera, Siemens Bertoni

Source: http://www.facen.una.py/wp-content/uploads/2015/03/RevistaSteviana_v6.pdf

Microsoft word - 2013_cacs_symposium_program_long061113.docx

2013 Tri-State CACS Annual Symposium New Challenges and Opportunities Facing the Global Chemical Enterprise The Department of Medicinal Chemistry Ernest Mario School of Pharmacy, Rutgers University 8:30 am – 4:00 pm Saturday, June 22, 2013 Busch Campus Center Rutgers University 604 Bartholomew Rd

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Surface-plasmon-resonance-based biosensors for food diagnostics SPR based biosensors Key words surface plasmon resonance, SPR, biosensor, additive, residue, contaminant,pesticide, herbicide, veterinary drug, antibiotic, bacteria, pathogen, toxin, allergen,analysis Completed by How does it work? analytical tooldetection and (semi)quantification of low levels of biological and chemicalsubstances in foods (e.g. veterinary drugs, pathogenic bacteria/toxins, vitamins,pesticides, allergens) based on the principle of specific biological recognition.